VE-821是ATR抑制剂

　　VE-821 是一种有效的 ATP 竞争性的 ATR 抑制剂，Ki/IC50 为 13 nM/26 nM。

 

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　　生物活性

 

　　体外研究

 

　　VE-821对ATR显示出优异的选择性，对相关的PIKKs，如ATM、DNA-PK、mTOR和PI3Kγ的交叉反应性极小（其Kis分别为16 μM、2.2 μM、>1 μM和3.9 μM），并且对大量无关蛋白激酶的交叉反应性也很小[1]。VE-821（化合物27）也抑制ATM和DNA-PK，其IC50分别为>8 μM和4.4 μM[2]。VE-821显著提高了PSN-1、MiaPaCa-2和原代PancM胰腺癌细胞对辐射和吉西他滨的敏感性，无论是在常氧还是缺氧条件下。VE-821通过抑制ATR，导致癌细胞中辐射引起的G2/M停滞被抑制。在PSN-1和MiaPaCa-2细胞中，1 µM VE-821能够在辐射后2小时内抑制Gemcitabine（100 nM）、辐射（6 Gy）或两者处理后的Chk1（Ser 345）磷酸化[3]。

 

　　MCE尚未独立确认这些方法的准确性。这些内容仅供参考。

 

　　实验参考方法

 

　　激酶检测[2]

 

　　使用放射性磷酸盐掺入测定，测试化合物（例如VE-821）抑制ATR、ATM或DNAPK激酶活性的能力。准备一个库存溶液，其中包含适当的缓冲液、激酶和目标肽。向其中添加感兴趣的化合物，以不同浓度溶解在DMSO中，使最终DMSO浓度为7%。通过添加合适的[g-33P]ATP溶液来开始检测，并在25°C下孵育。通过加入磷酸和ATP以达到最终浓度100 mM和0.66 μM，在所需时间后停止检测。肽被捕获在磷纤维素膜上，准备并用200 μL的100 mM磷酸清洗六次，然后添加100 μL的闪烁剂，并在1450 Microbeta液体闪烁计数器上进行闪烁计数。剂量−反应数据使用GraphPad Prism软件分析[2]。

 

　　细胞检测[3]

 

　　将MiaPaCa-2、PSN-1和Panc1细胞（5×10^4）接种到96孔板中，4小时后用逐渐增加浓度的VE-821处理，并在照射前1小时注入单次4 Gy的辐射。在辐射后的72小时更换培养基，此时使用Alamar Blue法测量细胞活力。细胞允许增殖，并在第10天再次分析不同处理条件下的细胞活力。细胞活力和存活分数相对于未处理（对照）组进行标准化[3]。

 

　　MCE未独立确认这些方法的准确性，仅供参考。

 

　　参考文献

 

　　[1]. Reaper PM, et al. Selective killing of ATM- or p53-deficient cancer cells through inhibition of ATR. Nat Chem Biol. 2011 Apr 13;7(7):428-30.

 

　　[2]. Charrier JD, et al. Discovery of potent and selective inhibitors of ataxia telangiectasia mutated and Rad3 related (ATR) protein kinase as potential anticancer agents. J Med Chem. 2011 Apr 14;54(7):2320-30.

 

　　[3]. Prevo R, et al. The novel ATR inhibitor VE-821 increases sensitivity of pancreatic cancer cells to radiation and chemotherapy. Cancer Biol Ther. 2012 Sep;13(11):1072-81.

 

　　[4]. Muralidharan SV, et al. BET bromodomain inhibitors synergize with ATR inhibitors to induce DNA damage, apoptosis, senescence-associated secretory pathway and ER stress in Myc-induced lymphoma cells. Oncogene. 2016 Sep 8;35(36):4689-97.