N-Formyl-Met-Leu-Phe缩写fMLP

　　N-Formyl-Met-Leu-Phe (fMLP; N-Formyl-MLF) 是一种趋化肽和N-甲酰基肽受体 (FPR) 的特异性配体。报道显示N-Formyl-Met-Leu-Ph 可抑制 TNF-alpha 的分泌。

 

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　　生物活性

 

　　体外研究

 

　　N-Formyl-Met-Leu-Phe 与其特定细胞表面受体 N-甲酰基肽受体 (FPR) 的结合会触发不同的生化事件级联，最终导致细胞活化。FPR 是属于 G 蛋白偶联受体家族的趋化受体。N-Formyl-Met-Leu-Phe 在成骨细胞分化条件下促进成骨细胞定型并抑制脂肪形成定型。N-Formyl-Met-Leu-Phe 刺激成骨与成骨标记物和矿化的表达增加有关。N-Formyl-Met-Leu-Phe 抑制过氧化物酶体增殖物激活受体-γ1 的表达。N-Formyl-Met-Leu-Phe 刺激的成骨分化是通过 FPR1-磷脂酶 C/磷脂酶 D-Ca2+-钙调蛋白依赖性激酶 II-ERK-CREB 信号通路介导的[1]。

 

　　N-Formyl-Met-Leu-Phe 是一种细菌衍生肽，可在人外周血单核细胞中诱导促炎细胞因子基因表达。细菌产物 LPS 和 N-Formyl-Met-Leu-Phe 通过多种信号通路协同诱导炎症反应。TLR4、IKKβ-IκBα 和 NF-κB 信号通路通过 p65 核转位依赖机制参与 TNF-α 的协同诱导[2]。

 

　　体内研究

 

　　N-Formyl-Met-Leu-Phe 促进斑马鱼和兔子的骨形成。在超过 80% 的 N-甲酰基-Met-Leu-Phe 处理的斑马鱼中，5 dpf 的骨骼发育明显。用 N-Formyl-Met-Leu-Phe 处理导致 Runx2 的表达增加。在 N-Formyl-Met-Leu-Phe 处理的颅骨中，骨髓腔广泛形成，覆盖骨的结缔组织致密，如骨膜[1]。N-Formyl-Met-Leu-Phe 介导钙卫蛋白从 PMN 体外 释放。它以剂量依赖性方式诱导钙卫蛋白从 PMN 中释放。在 N-Formyl-Met-Leu-Phe 浓度为 0.1-10.0 nM 时，至少保留 10% 的总 PMN 钙卫蛋白[3]。

 

　　实验参考方法

 

　　细胞测定

 

　　细胞同时转染使用IκBα的显性负性形式或IKKβ的显性负性形式以及NF-κB依赖的荧光素酶报告质粒。质粒pCMVβ用作转染效率的对照，并通过β-半乳糖苷酶的表达进行监测。使用DEAE-葡聚糖进行短暂转染，转染后的细胞在培养基中培养48小时，然后在培养基±N-甲酰-甲硫氨酸-亮氨酸-苯丙氨酸（FMLP）、LPS或FMLP/LPS下孵育6小时。使用荧光素酶检测试剂盒和Monolight 3010荧光计测定荧光素酶活性[2]。

 

　　MCE尚未独立确认这些方法的准确性。仅供参考。

 

　　动物给药

 

　　小鼠：N-甲酰-甲硫氨酸-亮氨酸-苯丙氨酸（FMLP）溶解于无菌PBS中。在麻醉状态下，用LPS（0.3 mg/kg）或FMLP（0.5 mg/kg）或FMLP和LPS在50μL无菌PBS中经鼻腔给药小鼠。通过用无菌PBS针刺气管进行支气管肺泡灌洗（BAL），BAL液中的细胞经细胞离心机离心后用Wright-Giemsa染色。对于TNF-α蛋白的释放，收集BAL液并使用上述所述的ELISA方法测量分泌的TNF-α[2]。

 

　　参考文献

 

　　[1]. Shin MK, et al. N-formyl-methionyl-leucyl-phenylalanine (fMLP) promotes osteoblast differentiation via the N-formyl peptide receptor 1-mediated signaling pathway in human mesenchymal stem cells from bone marrow. J Biol Chem. 2011 May 13;286(19):17133-43.

 

　　[2]. Chen LY, et al. Synergistic induction of inflammation by bacterial products lipopolysaccharide and fMLP: an important microbial pathogenic mechanism. J Immunol. 2009 Feb 15;182(4):2518-24.

 

　　[3]. Hetland G, et al. Chemotaxins C5a and fMLP induce release of calprotectin (leucocyte L1 protein) from polymorphonuclear cells in vitro. Mol Pathol. 1998 Jun;51(3):143-8.