Nutlin-3是一种有效的p53-MDM2抑制剂

　　Nutlin-3 是一种有效的 p53-MDM2 抑制剂，Ki 为 90 nM。

 

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　　生物活性

 

　　体外研究

 

　　Nutlin-3是MDM2-p53相互作用的抑制剂。特别是在p53阳性的HCT116细胞中，用1μM的Inauhzin和2μM的Nutlin-3共同处理能更显著地激活p53，通过测量其蛋白水平以及其靶蛋白p21、PUMA或cleaved PARP的水平来指示细胞凋亡。Nutlin-3是一种小分子抑制剂，可以抑制MDM2与p53结合以及随后的p53依赖的DNA损伤信号传导。作为单独的药物，Nutlin-3（2-10μM）能稳定p53和p21WAF的水平，并对WTp53-22RV1细胞具有毒性（IC50为4.3μM），但对p53缺失细胞的毒性很小（IC50>10μM）。Nutlin-3以剂量依赖的方式诱导22RV1细胞中p53和p21WAF的表达。短期细胞周期实验显示，以10μM的剂量，Nutlin-3稍微增加了三种细胞系的G1期比例，并减少了S期比例。

 

　　体内研究

 

　　Nutlin-3能够抑制源自人骨肉瘤或白血病细胞的异种移植瘤的生长，即使以每次口服200 mg/kg的剂量给予Nutlin-3，在HCT116源异种移植瘤模型中其抗肿瘤活性也仅有限。Nutlin-3可能是改善使用针对缺氧细胞的精确放射治疗的治疗比例的有用辅助药物，并值得进一步进行体内研究。相关产品推荐：Amifostine氨磷汀是一种广谱细胞保护剂和辐射防护

 

　　MCE尚未独立确认这些方法的准确性。仅供参考。

 

　　实验参考方法

 

　　细胞检测方法：

 

　　使用人非小细胞肺癌野生型p53含有的H460和A549细胞、人非小细胞肺癌p53缺失的H1299细胞，以及p53+/+和p53-/-的人结肠癌HCT116细胞。将细胞（1.5×105个）播种到6孔板中，并在37°C下孵育过夜。在指定浓度下处理Inauhzin和Nutlin 3，处理48小时后，收集细胞，以70%冷冻乙醇固定过夜于-20°C，用丙碘胺溶液（50 µg/mL PI，0.1 mg/mL RNase A，0.05% Tritin X-100 in PBS）悬浮40分钟于37°C，然后使用流式细胞术和专有软件分析DNA含量。

 

　　MCE没有独立确认这些方法的准确性。仅供参考。

 

　　动物给药方法：

 

　　使用小鼠

 

　　使用五周大的雌性SCID小鼠。将3×106个HCT116p53+/+细胞皮下接种到右侧胁腹部，并使用卡尺监测肿瘤生长。当平均肿瘤体积达到50-100 mm3时，给予小鼠腹腔注射Inauhzin，口服Nutlin 3，或给予对照组（Inauhzin使用4% DMSO，Nutlin 3使用EtOH: Tween: 5% Glucose=5:5:90）。每隔一天测量肿瘤体积，并在治疗的最后一天计算肿瘤生长的抑制率（T/C）。