α-Amanitin别名alpha-鹅膏覃碱

　　α-Amanitin 是几种致命毒蘑菇的主要毒素，通过抑制RNA 聚合酶 II (RNA-polymerase II) 发挥其毒性作用。

 

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　　生物活性

 

　　体外研究

 

　　α-Amanitin 降低 MKN45 细胞中的 TAF15 mRNA 和 TAF15 蛋白水平，并抑制 RNAPII 对 TAF15 mRNA 的活性。

 

　　α-Amanitin 在浓度为 100、10、1、0.1 和 0.01 μg/mL 时，细胞活力分别降低 14%、21%、41%、44% 和 50%。α-Amanitin 在 36 h 的 LD50 测得为 1 μg/mL。与对照相比，1 μg/mL 剂量的 α-Amanitin 在 24 小时时细胞内的蛋白质总量显著增加。

 

　　α-Amanitin 显著降低卵丘细胞间隙连接基因 (Gja1、Gja4 和 Gjc1) 以及 FSHr 和 LHr 的表达。

 

　　体内研究

 

　　α-Amanitin 静脉注射 BALB/c 小鼠后的 LD50 为 0.327 mg/kg。尾静脉注射 α-Amanitin 12 h后，血清中 WBC、RBC 和 HGB 水平显著下降，而 BUN 和 Crea 水平显著升高。α-Amanitin 抑制某些基因 (Hsp90b1、Irx4 等)，其编码的蛋白质调节 RNA 聚合酶 II 活性。α-Amanitin 下调一些参与转录进程的蛋白质 (Nmi、Trpc5 等)。

 

　　α-Amanitin 在 DTC 抑制方面具有强大的活性。注射 α-Amanitin (0.4 mg/kg，ip) 处理的细胞的小鼠体重保持不变，而接受腹腔注射 MKN45 细胞的小鼠体重持续下降

 

　　实验参考方法

 

　　细胞测定

 

　　MTT测定用于评估培养细胞的整体功能完整性和存活率。将MCF-7细胞放入96孔板（每孔2×104个细胞），孵育24小时。将alpha-Amanitin和β-Amanitin以特定浓度加入细胞培养基中，再孵育36小时。然后向细胞培养基中添加MTT溶液（1:10比例）和二甲基亚砜（DMSO）（100 µL），孵育过夜。使用板式读数器在570 nm处测量吸光度。重复进行3次实验。根据对照组计算吸光度数据的百分比。

 

　　MCE尚未独立确认这些方法的准确性。仅供参考。

 

　　动物给药

 

　　对于肿瘤形成性测试，将未经处理的六个MKN45细胞系的集落和来自DTCs的细胞分别注射到六只6周大的雌性裸鼠（BALB/cAjcl-nu/nu）的背部左右两侧皮下。接种后监测这些小鼠，直到肿瘤达到最大直径10mm或49天，并随后安乐死。对于PC模型，将1.0×106个MKN45细胞注射到六只6周大的雌性裸鼠（BALB/cAjcl-nu/nu）的腹腔。然后给小鼠治疗CIS（4.0mg/kg，腹腔内给药）或CIS和alpha-Amanitin的联合治疗（0.4mg/kg，腹腔内给药）。对于联合治疗，alpha-Amanitin在CIS之前24小时给予。治疗后监测体重，持续28天。