Y15是FAK激酶抑制剂

　　Y15是一种有效，特异性的粘着斑激酶抑制剂 (FAK)，可抑制其自身磷酸化活性，降低癌细胞的活力，阻断肿瘤生长。

 

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　　生物活性

 

　　体外研究

 

　　Y15 直接阻断 FAK 的自磷酸化活性。Y15 在 Panc-1 细胞中从 0.1 μM 开始抑制 FAK 的 Y397 磷酸化。在 100 μM 的剂量下，Y15 具有与 TAE226 相同或更好的抑制作用。值得注意的是，总 FAK 在较高剂量的 Y15 下调。Y15 还阻断 FAK 下游底物桩蛋白的磷酸化。在类似于 FAK 的较高剂量下总桩蛋白减少。因此，Y15 以剂量依赖的方式抑制 FAK 磷酸化。MTS 测定是在所有细胞系 (分别为 TT、K1、BCPAP 和 TPC1) 上使用一系列 Y15 剂量完成的。Y15 在所有评估的甲状腺细胞系中以剂量依赖性方式抑制细胞活力。对于 TT、TPC1、BCPAP 和 K1，IC50 值分别为 2.05、5.74、9.99 和 17.54 μM。

 

　　在用 Y15 处理的巨噬细胞中，丝状伪足和 lamellipodia 保持移动。在用 Y15 处理的细胞中，巨噬细胞周围的颗粒苔藓显得更大

 

　　体内研究

 

　　用 FAK 和 IGF-1R 酪氨酸激酶双重抑制剂 TAE226 处理携带 Panc si-ctrl 肿瘤异种移植裸鼠，为 FAK和IGF-1R 双重抑制的抗肿瘤作用提供参考。在没有药物处理的情况下，Panc si5-IGF-1R 异种移植肿瘤比 Panc si-ctrl 异种移植肿瘤生长慢 (Panc si5-IGF-1R/PBS vs. Panc si-ctrl/PBS)，表明仅通过抑制 IGF-1R 通路实现中度肿瘤抑制. Y15 处理对 FAK 活性的进一步抑制更显著地抑制了 Panc si5-IGF-1R 异种移植肿瘤的生长 (Panc si5-IGF-1R/PBS 对比 Panc si5-IGF-1R/ Y15)。在用 TAE226 处理的 Panc si-ctrl 异种移植物中观察到类似的抗肿瘤作用 (Panc si5-IGF-1R/ Y15 对比 Panc si-ctrl/TAE226)。小鼠在整个实验过程中表现出正常的梳理和进食习惯  产品推荐：Defactinib型FAK抑制剂

 

　　实验参考方法

 

　　激酶测定

 

　　在含有激酶缓冲液的条件下，将10 μCi的[γ-32P]-ATP与0.1 μg纯化的FAK蛋白一起孵育。激酶反应在室温下进行5分钟，并通过加入2×Laemmli缓冲液停止反应。使用Ready SDS-10% PAGE凝胶分离蛋白质，并通过放射自显影法可视化磷酸化的烯酮酸。

 

　　细胞实验

 

　　细胞在不同浓度的Y15或TAE226处理下培养24小时。加入Promega细胞活力试剂盒中的3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧甲氧基苯基)-2-(4-磺酰基苯基)-2H-四唑化合物，细胞在37°C下孵育1-2小时。使用微孔板读取器在490 nm波长下分析96孔板上的光密度以确定细胞存活率。此外，在Y15处理后的24小时，用尝试蓝染色，并用血球计数板确定染色阳性细胞的百分比。

 

　　MCE未独立验证这些方法的准确性。仅供参考。

 

　　动物给药

 

　　小鼠

 

　　使用6周龄的雌性裸鼠。将5×106 Panc si5-IGF-1R细胞与基质凝胶混合，然后皮下注射到禁忌素缺乏的裸鼠的胁腹部（第0天）。在第7天，随机将动物分为两组。一个组（n=5）接受Y15（30 mg/kg）治疗，另一个组接受PBS作为对照治疗（n=5）。对于Panc si-ctrl移植瘤，将5×106 Panc si-ctrl细胞与基质凝胶混合，然后皮下注射到裸鼠的胁腹部。这些动物也在第7天随机分为两组，其中一个组（n=5）接受TAE226（30 mg/kg），另一个组接受PBS（n=5）作为对照治疗。药物和PBS通过腹腔注射总体积为0.1 mL。从第10天开始，每隔3或4天测量肿瘤大小（长度(mm)×宽度(mm)）。肿瘤体积计算公式为体积(cm3) = 1/2×长度(cm)×宽度(cm)2。