PTC124是什么

    Ataluren (PTC124) 是可口服的 CFTR-G542X 无义等位基因抑制剂

    体外

    这种过早的“停止”信号（I类突变）阻止细胞产生全长CFTR蛋白。 Ataluren（PTC124） - 一种新的化学实体，可选择性诱导早熟但非正常终止密码子的核糖体通读。

    体内

    Ataluren（PTC124）活性，使用含有无义酶的报告基因进行优化，促进表达肌营养不良蛋白无义等位基因的人和mdx小鼠的原代肌细胞中肌营养不良蛋白的产生，并在药物暴露后2-8周内在mdx小鼠中挽救横纹肌功能。 Ataluren（PTC124）在血浆暴露中对动物的耐受性基本上超过无义抑制所需的那些。 为了诱导无义抑制并增加PPT1酶活性，通过腹膜内（i.p.）注射给予2天龄雄性Cln1R151X小鼠的通读药物Ataluren（PTC124）。 在原理证明研究中，这些治疗每天进行四次，连续2天。 使用10 mg / kg时，Ataluren（PTC124）在肝脏中增加PPT1酶活性（通过非配对t检验P = 0.0001）和蛋白质水平（P = 0.0014，通过非配对t检验），但不增加PPT1酶活性或 皮质中的蛋白质水平。 这种组织特异性效应可能是由于Ataluren（PTC124）无法破坏血脑屏障（BBB），这降低了大脑中Ataluren（PTC124）的生物利用度，并阻止了Ataluren（PTC124）达到有效浓度 在治疗窗内

    实验参考方法

    细胞分析

    将含有LUC-190（UGA）的HEK293细胞的一式两份样品在5μMAtaluren（PTC124）（处理的）或1％DMSO（未处理）的存在下孵育20小时。 收集细胞，在磷酸盐缓冲盐水（PBS）中洗涤两次，重悬于样品缓冲液（Bio-Rad）中并在干冰上运输至Kendrick Laboratories进行二维电泳分析等电聚焦（pH 3.5-10）在 玻璃管，20,000 V小时。 向每个样品中加入1μg原肌球蛋白内标。 第二维SDS平板凝胶电泳在每个凝胶25mA下进行约6小时。 电泳后，将凝胶转移到PVDF纸上。 使用Phoretix软件的现场移动性的计算机化分析。

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。

    动物实验研究

    小鼠

    将雄性小鼠随机分配到治疗组或媒介物对照组。 每组6至8只小鼠用10或100mg / kg Ataluren（PTC124）溶解于含有DMSO的PBS（2％用于10mg / kg和20％用于100mg / kg）和（2-羟丙基）-β- 环糊精（22％）经腹膜内（ip）注射，每日4次，连续2天。 用药物载体处理六至八只对照小鼠：含有DMSO（2％或20％）和（2-羟丙基）-β-环糊精（22％）的PBS。 在第二天最后一次注射后立即收集组织并在-80℃下储存以供进一步使用。

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。