CHK1抑制剂Rabusertib

　　Rabusertib (LY2603618) 是一种有效的选择性的 Chk1 抑制剂，IC50 为 7 nM。

 

　　MCE 的所有产品仅用作科学研究或药证申报，我们不为任何个人用途提供产品和服务

 

　　我们将采用定制合成服务的方式为您快速提供所需产品和技术服务

 

　　生物活性

 

　　体外研究

 

　　Rabusertib (LY2603618)是一种高效的Chk1生物学多方面抑制剂。在体外，Rabusertib（LY2603618）针对51种不同的蛋白激酶进行了测试。其对Chk1的IC50为7 nM，使Rabusertib（LY2603618）对Chk1的抑制力约为对其他任何蛋白激酶（PDK1，IC50=893 nM，其他>1000 nM）的100倍。Rabusertib（LY2603618）有效降低了Chk1的自磷酸化，其EC50为430 nM。用Rabusertib（LY2603618）抑制Chk1也可以有效消除处理DNA损伤剂的细胞中的G2/M DNA损伤检查点。用Rabusertib（LY2603618）处理细胞产生的细胞表型与RNAi消耗Chk1报道的表型相似。通过Rabusertib（LY2603618）抑制细胞内Chk1会导致DNA合成受损，H2A.X磷酸化水平升高，这表明DNA损伤，并提前进入有丝分裂。以不同浓度的Rabusertib（LY2603618）处理SK-N-BE(2)细胞，可通过MTT检测得出其对细胞生长的剂量依赖性抑制作用，IC50为10.81 µM。

 

　　体内研究

 

　　携带Calu-6异种移植瘤的小鼠接受150 mg/kg（IP）Gemcitabine和单次同时口服200 mg/kg的Rabusertib（LY2603618）治疗。200 mg/kg的Rabusertib（LY2603618）足以在2小时内体内抑制85％的Chk1自磷酸化。Rabusertib（LY2603618）也有效地降低了Gemcitabine诱导的Tlk丝氨酸695位点的磷酸化，这支持了使用Chk1选择性化学抑制剂的报告。

 

　　实验参考方法

 

　　细胞实验

 

　　在96孔组织培养板上每孔种植2.5×103个细胞，并孵育一个细胞倍增期（18-24 h）。根据半对数步骤设置Gemcitabine浓度，在最终浓度范围1-1000 nM之间进行。Rabusertib (LY2603618)是通过在DMSO中稀释至5000x最终浓度，然后在培养基中稀释1000倍，生成用于添加到孔的5×储备液。Gemcitabine添加约24小时后，添加Rabusertib (LY2603618)。每次组合都需要进行三次复制。在添加Rabusertib (LY2603618)后的两个细胞倍增期，根据制造商的说明将MTS/PMS试剂加入每个孔。在490 nm处使用Spectra Max 250 分光光度计读取吸光值，并使用GraphPad Prism 4.0分析数据。剂量-反应曲线通过非线性回归进行拟合，底部拟合限制为0%抑制。

 

　　MCE尚未独立确认这些方法的准确性。仅供参考。

 

　　动物给药

 

　　小鼠

 

　　用于这些研究的是雌性Harlan无胸腺裸鼠（26-28 g）。肿瘤生长是通过皮下注射1×106个Calu-6细胞在无血清生长培养基和Matrigel的1:1混合物中，在每个受试动物的后腹部启动。当肿瘤体积达到大约150 mm3时，动物按照肿瘤大小和体重被随机分配，并被放入各自的治疗组。每只动物接受2次注射，一次是生理盐水或150 mg/kg Gemcitabine通过腹腔注射以200 μL的容积给药，另一次是Captisol载体或者口服LY2603618，也是以200 μL的容积给药。