Linsitinib是IGF-1和胰岛素受体的双重抑制剂

　　Linsitinib(OSI-906)是一种有效选择性的，具有口服活性的IGF-1和胰岛素受体(IR)的双重抑制剂，IC50分别为35和75 nM。

 

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　　Linsitinib是IGF-1和胰岛素受体的双重抑制剂的生物活性

 

　　体外研究

 

　　Linsitinib抑制IGF-1R自磷酸化和下游信号蛋白Akt、ERK1/2和S6激酶的激活，IC50为0.028至0.13μM。Linsitinib通过与C螺旋的相互作用使靶蛋白形成中间构象。Linsitinib在肝微粒体中表现出良好的代谢稳定性。Linsitinib在浓度为1μM时完全抑制IR和IGF-1R磷酸化。Linsitinib抑制多种肿瘤细胞系的增殖，包括非小细胞肺癌和结直肠癌(CRC)肿瘤细胞系，EC50为0.021至0.810μM。

 

　　体内研究

 

　　Linsitinib在IGF-1R驱动的异种移植小鼠模型中抑制肿瘤生长，在75 mg/kg剂量下有100%TGI和55%消退，在25 mg/kg剂量下有60%TGI无消退。Linsitinib给药在狗、大鼠和小鼠中诱导不同的自身消除半衰期，消除半衰期分别为1.18小时、2.64小时和2.14小时。Linsitinib在雌性Sprague-Dawley大鼠和雌性CD-1小鼠中以不同的单剂量每天一次给药表明Vmax与Linsitinib剂量不成比例。Linsitinib在给药12天后以25 mg/kg的剂量升高血糖水平。在IGF-1R驱动的全长人IGF-1R(LISN)异种移植小鼠模型中以75 mg/kg的单剂量给予Linsitinib，在4至24小时内使用血浆药物实现对IGF-1R磷酸化的最大抑制(80%)浓度为26.6-4.77μM。在NCI-H292异种移植小鼠中以60 mg/kg的单剂量给药Linsitinib在体内处理后2、4和24小时抑制葡萄糖摄取。Linsitinib在NCI-H292异种移植小鼠模型中抑制肿瘤的生长

 

　　实验参考方法

 

　　激酶分析

 

　　蛋白激酶分析要么通过ELISA基础的测定方法在室内进行（IGF-1R,IR,EGFR和KDR），要么通过放射性方法与浓度为100µM的ATP一起进行。室内ELISA测定使用poly(Glu:Tyr)作为结合到96孔测定板表面的底物，通过使用连接到辣根过氧化物酶的抗磷酸酪氨酸抗体来检测磷酸化。通过测量405/490 nm的吸光度，使用ABTS作为过氧化物酶底物来定量结合的抗体。所有测定都使用纯化的重组激酶催化领域。人的IGF-1R或EGFR的重组酶以氨基末端谷胱甘肽S-转移酶融合蛋白在昆虫细胞中表达，并在室内纯化。IC50值从百分比抑制与log10化合物浓度的sigmoidal剂量响应图中确定。除非另有指示，否则在室内测定将执行至少三次测量，每次均进行两次。Linsitinib在1µM的浓度下，通过使用ProfilerPro™激酶选择性测定试剂盒，对一系列的激酶进行分析。

 

　　细胞分析

 

　　对细胞增殖的测定，细胞被种植在含有FCS 10%的适当培养基中的96孔板中，并在Linsitinib的各种浓度存在下孵育3天。通过使用CellTiterGlo检测细胞内ATP含量的发光定量法来确定细胞生长的抑制。数据呈现为最大增殖的一部分，通过将存在Linsitinib不同浓度下的细胞密度除以仅用载体（DMSO）处理的对照细胞的细胞密度来计算。相关产品推荐：色瑞替尼Ceritinib是ALK抑制剂

 

　　MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

 

　　动物实验

 

　　在细胞增长的指数阶段，从细胞培养瓶中收集细胞，用无菌PBS洗涤两次，调整到适合的浓度，然后在雌性nu/nu CD-1小鼠右侧胁部进行皮下植入。在随机分配到每组8只小鼠进行有效性研究前，确定肿瘤大小为200±50 mm3。按照指示口服给予Linsitinib或载体。所示的%TGI值是整个剂量期间的中位数%TGI。至少505的TGI被认为是显著的。生长延迟计算为T-C，其中T和C是治疗（T）和对照（C）组中平均肿瘤大小达到初始肿瘤体积400%的天数。治愈被排除在这个计算之外。