PI3K和mTOR抑制剂Dactolisib
2024-03-20 
MCE
Dactolisib(BEZ235)是一种具有口服活性的、双重的pan-class I PI3K和mTOR抑制剂，作用于p110α/γ/δ/β和mTOR，IC50分别为4 nM/5 nM/7 nM/75 nM和20.7 nM。Dactolisib(BEZ235)抑制mTORC1和mTORC2。
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PI3K和mTOR抑制剂Dactolisib的生物活性
体外研究
Dactolisib(BEZ235)强力抑制PI3K，这是一种与ATP竞争的方式。Dactolisib(BEZ235)（250 nM）显著降低了mTOR激活的蛋白激酶p70S6K的磷酸化水平。Dactolisib(BEZ235)还导致S235/S236P-RPS6级别降低，IC50为6.5 nM，暗示Dactolisib(BEZ235)可以直接抑制mTOR激酶，因为mTOR的激酶领域与IA类PI3K的高度同源。使用生物化学mTOR K-LISA测定法证实了Dactolisib(BEZ235)对mTOR的活性（IC50，20.7 nM）。
Dactolisib(BEZ235)对HCT116、DLD-1和SW480细胞系的IC50分别为14.3±6.4、9.0±1.5和12.0±1.6 nM。
体内研究
Dactolisib(BEZ235)（45 mg/kg，口服）治疗在一个GEM模型中引起偶发的PIK3CA野生型CRC的结肠肿瘤退化。Dactolisib(BEZ235)（45 mg/kg）被口服给MENX大鼠（每组2只），并在治疗后1或6小时牺牲动物。对P-AKT和P-S6的免疫染色显示出两种蛋白质的显著减少，尤其是在Dactolisib(BEZ235)治疗后6小时与PEG处理的大鼠比较时的P-S6。治疗后6小时，Dactolisib(BEZ235)处理的大鼠的垂体腺瘤具有与安慰剂处理的大鼠的肿瘤明显不同的蛋白质组学特征。相关产品推荐：Rapamycin-雷帕霉素
MCE并未独立确认这些方法的准确性。仅供参考。
实验参考方法
细胞检测
HCT116(PIK3CA突变;H1047R位点的激酶结构域),DLD-1(PIK3CA突变;E545K位点的螺旋结构域),以及SW480(PIK3CA野生型)人源性大肠癌细胞系(ATCC)和同源DLD-1 PIK3CA突变和野生型细胞在DMEM中维持。细胞在不同初始密度下进行种植(HCT116:每孔3000个细胞,DLD-1:每孔5500个细胞,SW480:每孔4500个细胞,DLD-1 PIK3CA突变:每孔7000个细胞,及DLD-1 PIK3CA野生型:每孔9000个细胞)以考虑到生长动力学的差异。16小时后，细胞用不断增加的BEZ235浓度(10,100,1000 nM)进行孵育，每24小时更换含药生长培养基。在最初种植后16小时和开始药物处理后48小时，使用比色法的MTS试验CellTiter 96 AQueous One Solution Cell Proliferation Assay评估细胞活性。经过药物处理后的细胞活性被规范化为未处理的也生长了48小时的细胞。使用GraphPad Prism 5中的四参数非线性回归计算IC50值。
动物实验
小鼠
患有肿瘤的Apc CKO小鼠被随机分配进行单独的对照试剂（n=8）或每公斤体重45mg的BEZ235在10%的1-甲基-2-吡咯烷酮/90%PEG 300（n=8）中，通过每日口腔灌流进行28天的治疗。治疗剂量是根据文献指出每公斤体重40-50 mg的BEZ235可以有效地治疗小鼠肿瘤模型而无不良反应选择的。基于药代动力学研究显示，在NVP-BEZ235给药后一小时达到最大组织浓度，肿瘤携带的小鼠在最后的治疗剂量后一小时被处死。用卡尺(width×length×height)评估结肠肿瘤体积，并收集肿瘤进行western blot分析和免疫组织化学。相关产品推荐：3-Methyladenine是 PI3K 的抑制剂
大鼠
使用MENX负面影响的大鼠。在MENX受影响的大鼠中，对BEZ235进行了三个剂量的测试：20,30,和45 mg/kg。由于在治疗10天后，两个较高剂量导致体重下降超过10%，因此在进一步的研究中使用了20 mg/kg的剂量。对于MRI研究，7到8个月的MENX影响的大鼠（具有可观的腺瘤但仍然健康）用每天灌流BEZ235(20 mg/kg)或安慰剂(PEG)治疗14天。
MCE并没有独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。
