Momelotinib是ATP竞争性的JAK1/JAK2抑制剂

　　Momelotinib(CYT387)是ATP竞争性的JAK1/JAK2抑制剂，IC50值分别为11 nM/18 nM，是对JAK3选择性的10倍左右。

 

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　　生物活性

 

　　体外研究

 

　　Momelotinib(CYT387)抑制IL-3刺激的亲本Ba/F3细胞(Ba/F3-wt)的增殖，IC50为1400 nM。此外，Momelotinib(CYT387)还会抑制由JAK2或MPL信号激活的细胞系的细胞增殖，包括Ba/F3-MPLW515L细胞、CHRF-288-11细胞和Ba/F3-TEL-JAK2细胞，IC50分别为200 nM、1 nM和700 nM。此外，Momelotinib(CYT387)已显示在体外抑制JAK2V617F阳性PV患者的红细胞集落生长，具有相似的效力，IC50为2μM-4μM。Momelotinib(CYT387)抑制由IL-6和IGF-1诱导的PI3K/AKT和Ras/MAPK信号传导。此外，Momelotinib(CYT387)作为单一药物诱导细胞凋亡，并与传统的抗MM疗法PS-341和L-PAM在原发性多发性骨髓瘤(MM)细胞中协同作用

 

　　体内研究

 

　　在小鼠MPN模型中，Momelotinib(CYT387)可使白细胞计数、血细胞比容、脾脏大小恢复正常，并恢复炎性细胞因子的生理水平。

 

　　实验参考方法

 

　　激酶检测

 

　　在肽基质磷酸化反应中使用昆虫细胞表达的带有谷胱甘肽-S-转移酶（GST）标签的JAK激酶域，该激酶域在使用前已被纯化。检测过程是在384孔optiplates中进行的，使用了一种Alphascreen蛋白酪氨酸激酶P100检测试剂盒以及PerkinElmer Fusion Alpha设备。

 

　　细胞检测

 

　　使用Ba/F3细胞表达的JAK2V617F(Ba/F3-JAK2V617F)和MPLW515L(Ba/F3-MPLW515L)突变体，以及CHRF-288-11(JAK2T875N)和CMK(JAK3A572V)细胞。TEL/JAK2和TEL/JAK3融合体被生成并引入到Ba/F3小鼠细胞中。将TEL/JAK2-或TEL/JAK3-转染的细胞在含有10%胎牛血清(FCS)的Dulbecco's改良鹰式培养基(DMEM)中培养。Ba/F3野生型细胞在含有10%FCS且补充了5 ng/mL鼠IL-3的RPMI中培养。使用Alamar Blue试剂在37°C，5%CO2下孵育72小时后测量增殖。

 

　　动物实验

 

　　在骨髓移植后的第32天（所有小鼠都表现出严重的白细胞增多症和红细胞增多症），将小鼠分配到3个组，每个组的平均体重和血液计数相当。Momelotinib（CYT387）溶解在NMP中（最终浓度为120 mg/mL；1-甲基-2-吡咯烷酮）。随后，用0.14 M Captisol稀释CYT387/NMP混合物至6 mg/mL，并进一步用0.1M Captisol稀释至最终浓度4 mg/mL。所有3组小鼠（每组12只）从骨髓移植后的第34天到第82天（实验结束）接受通过口服灌流两次每天给予Momelotinib（CYT387），间隔10至12小时。小鼠接受没有Momelotinib（CYT387）的NMP/Captisol（0 mg/kg组），25 mg/kg Momelotinib（CYT387）或50 mg/kg Momelotinib（CYT387）。在骨髓移植后的第82天，除了每组50 mg/kg和25 mg/kg组的2只小鼠外，所有小鼠都被处死进行分析，这些小鼠停止了Momelotinib（CYT387）的治照并且被跟踪了45天。为了评估CYT387对正常血液计数的影响，用与骨髓移植实验小鼠组相同的方式给予初始的Balb/c小鼠车辆控制，50 mg/kg或100 mg/kg Momelotinib（CYT387）。在第14天、28天、42天和56天抽取外周血，并分析红细胞、白细胞、网织红细胞、粒细胞、淋巴细胞和单核细胞的水平。相关产品推荐：Ruxolitinib是JAK1/2 抑制剂

 

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