GSK-3α/β抑制剂Laduviglusib monohydrochloride

　　Laduviglusib(CHIR-99021)monohydrochloride是一种有效的选择性GSK-3α/β抑制剂，IC50为10 nM和6.7 nM。Laduviglusib monohydrochloride对GSK-3的选择性比CDC2，ERK2和其他蛋白激酶高500倍以上。Laduviglusib monohydrochloride还是一种有效的Wnt/β-catenin信号通路激活剂。Laduviglusib monohydrochloride可增强小鼠和人类胚胎干细胞的自我更新。Laduviglusib monohydrochloride能诱导细胞自噬(autophagy)。

 

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　　生物活性

 

　　体外研究

 

　　Laduviglusib monohydrochloride抑制人GSK-3β，Ki值为9.8 nM。Laduviglusib monohydrochloride是一种有机小分子，通过竞争ATP结合位点来抑制GSK3α和GSK3β。体外激酶测定表明，Laduviglusib monohydrochloride特异性抑制GSK3β(IC50=~5 nM)和GSK3α(IC50=~10 nM)，对其他激酶几乎没有影响。在Laduviglusib monohydrochloride存在下，ES-D3细胞的活力在2.5μM时降低24.7%，在5μM时降低56.3%，在7.5μM时降低61.9%，在10μM时降低69.2%，其IC50为4.9μM[

 

　　体内研究

 

　　在ZDF大鼠中，单次口服剂量Laduviglusib monohydrochloride(16 mg/kg或48 mg/kg)单盐酸盐可迅速降低血浆葡萄糖，给药后3-4小时最大降低近150 mg/dl。在照射前4小时给予Laduviglusib monohydrochloride(2 mg/kg)monohydrochloride一次，可显著提高14.5 Gy腹部照射(ABI)后的存活率。Laduviglusib monohydrochloride monohydrochloride处理显著阻断隐窝凋亡和p-H2AX+细胞的积累，并改善隐窝再生和绒毛高度。Laduviglusib monohydrochloride monohydrochloride处理通过阻断细胞凋亡增加Lgr5+细胞存活率，并早在4小时就有效阻止Olfm4、Lgr5和CD44的减少 同靶点产品推荐：Laduviglusib(GMP)有效的GSK-3αβ抑制剂

 

　　实验参考方法

 

　　细胞测定

 

　　使用MTT测定法，通过暴露于不同浓度的GSK3抑制剂后的三天来确定小鼠ES细胞的存活率。MTT活性的降低是一种可靠的基于代谢的测试方法，用于量化细胞存活率；这种降低与细胞存活的丧失相关。在含有LIF的ES细胞培养基中，将2000个细胞过夜播种在明胶涂层的96孔板上。第二天，将培养基更换为无LIF、低血清并添加0.1-1μM BIO或1-10μM SB-216763、CHIR-99021或CHIR-98014的培养基。作为对照组，使用不含GSK3抑制剂或DMSO的基础培养基。所有测试条件都以三重复进行分析。

 

　　MCE尚未独立确认这些方法的准确性。此内容仅供参考。

 

　　动物给药

 

　　大鼠

 

　　从体重<140g的雄性Sprague Dawley大鼠中制备主要肝细胞，在隔离后1-3小时内使用。将1×106个细胞的等分放入1mL DMEM/F12培养基中，加入0.2%BSA和CHIR-99021（口服16或48mg/kg）或对照组，于低速摇床上37°C的CO2富集大气中孵育30分钟，通过离心将其收集，并在缓冲A中加入0.01%NP40后进行裂解；然后再次进行GS测定。

 

　　小鼠

 

　　使用6-10周龄的小鼠。在C57BL/6背景（F10）上进行PUMA+/+和PUMA-/-的同胞配偶（littermates），以及Lgr5-EGFP(Lgr5-EGFP-IRES-creERT2)小鼠进行全身照射（TBI）或腹部照射（ABI）。小鼠于放射前4小时腹腔注射2mg/kg CHIR99021，或于放射前28小时和4小时腹腔注射1mg/kg SB415286。将小鼠牺牲，收集小肠进行组织学分析和免疫印迹分析。所有小鼠在牺牲前腹腔注射100mg/kg BrdU。

 

　　MCE尚未独立确认这些方法的准确性。此内容仅供参考。