Seliciclib是选择性的 CDKs 抑制剂
2019-04-11 
MCE小分子
Seliciclib (Roscovitine) 是有效，选择性的 CDKs 抑制剂，抑制 CDK5，CDK2 和 CDK2 的 IC50 分别为0.2 μM，0.65 μM，0.7 μM
体外
Seliciclib（Roscovitine）对某些细胞周期蛋白依赖性激酶具有高效率和高选择性。 用25种高度纯化的激酶（包括蛋白激酶A，G和C同种型，肌球蛋白轻链激酶，酪蛋白激酶2，胰岛素受体酪氨酸激酶，c-src，v-abl）研究Roscovitine的激酶特异性。 Seliciclib（Roscovitine）不会显着抑制大多数激酶。 仅Cdc2，Cdk2和Cdk5基本上被抑制（IC50值分别为0.65,0.7和0.2μM）。 Seliciclib（Roscovitine）对Cdk4k和Cdk6的抑制作用非常差（IC50>100μM）。 细胞外调节激酶erk1和erk2分别被抑制，IC50分别为34μM和14μM。 Seliciclib（Roscovitine）抑制哺乳动物细胞系的增殖，平均IC50为16μM。 Roscovitine降低了CDK5和p35的水平，同时上调了E-钙粘蛋白，但下调了波形蛋白和胶原蛋白IV。 此外，Seliciclib（Roscovitine）抑制高葡萄糖培养的NRK52E细胞迁移和侵袭的能力。
体内
与正常对照组相比，Seliciclib（Roscovitine）下调磷酸化ERK1 / 2和PPARγ伴随E-钙粘蛋白的增加，但波形蛋白和胶原蛋白IV减少。 相应地，Roscovitine减少糖尿病大鼠的肾小管间质纤维化。 Seliciclib（Roscovitine）通过ERK1 / 2 /PPARγ途径在糖尿病大鼠中有效减少肾小管间质纤维化。 Seliciclib（Roscovitine）（16.5 mg / kg）显着降低肿瘤生长速度并增加治疗小鼠的存活率。 引人注目的是，Seliciclib（Roscovitine）治疗导致一只小鼠完全肿瘤消失（25％）; 此外，在完成治疗后5个月，未发现该小鼠的肿瘤再生长。 用Roscovitine和对照小鼠治疗的小鼠之间小鼠体重没有显着差异，两组之间的行为差??异也可以忽略不计。 这些结果表明，Roscovitine可有效用作HPV +头颈癌的选择性肿瘤生长抑制剂
实验参考方法
细胞分析
使用大鼠肾小管上皮细胞（NRK52E）。 CDK5抑制剂Seliciclib（Roscovitine）（Ros .;10μM）和活化剂p35（15μM），PPARγ激动剂Rosiglitazone（Rosi .; 50nM）和ERK1 / 2抑制剂U0126（50nM）用于治疗NRK52E细胞。 每组细胞处理72小时，然后收获进行进一步分析。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
动物实验研究
大鼠
对雄性Sprague Dawley大鼠（6-8周龄）腹膜内注射单次注射稀释于0.1M柠檬酸盐缓冲液pH4.5（糖尿病）或柠檬酸盐缓冲液（非糖尿病）的链脲佐菌素（65mg / kg）。 在注射后三天，使用葡萄糖氧化酶法在葡萄糖分析仪上测定血浆葡萄糖浓度。 葡萄糖水平超过16.7mM的大鼠被认为是糖尿病，因此包括在研究中。 每周测量一次血浆葡萄糖水平。 为了研究CDK5抑制对肾小管间质纤维化的影响，每天向糖尿病大鼠腹膜内注射Roscovitine（25mg / kg）直至处死。 DMSO作为对照包括在内。
小鼠
将指数生长的UMSCC47细胞皮下注射到雌性NUDE小鼠的骶骨区域。 每只小鼠用50％基质胶中的2×105个细胞和100μL体积的50％PBS接种。 在肿瘤达到可测量的大小后，给予小鼠16.5mg / kg剂量的腹膜内Roscovitine或载体注射。监测体重，肿瘤生长和一般行为。 每3天测量肿瘤体积。当肿瘤超过0.5cm 3时，处死小鼠。
体外
Seliciclib（Roscovitine）对某些细胞周期蛋白依赖性激酶具有高效率和高选择性。 用25种高度纯化的激酶（包括蛋白激酶A，G和C同种型，肌球蛋白轻链激酶，酪蛋白激酶2，胰岛素受体酪氨酸激酶，c-src，v-abl）研究Roscovitine的激酶特异性。 Seliciclib（Roscovitine）不会显着抑制大多数激酶。 仅Cdc2，Cdk2和Cdk5基本上被抑制（IC50值分别为0.65,0.7和0.2μM）。 Seliciclib（Roscovitine）对Cdk4k和Cdk6的抑制作用非常差（IC50>100μM）。 细胞外调节激酶erk1和erk2分别被抑制，IC50分别为34μM和14μM。 Seliciclib（Roscovitine）抑制哺乳动物细胞系的增殖，平均IC50为16μM。 Roscovitine降低了CDK5和p35的水平，同时上调了E-钙粘蛋白，但下调了波形蛋白和胶原蛋白IV。 此外，Seliciclib（Roscovitine）抑制高葡萄糖培养的NRK52E细胞迁移和侵袭的能力。
体内
与正常对照组相比，Seliciclib（Roscovitine）下调磷酸化ERK1 / 2和PPARγ伴随E-钙粘蛋白的增加，但波形蛋白和胶原蛋白IV减少。 相应地，Roscovitine减少糖尿病大鼠的肾小管间质纤维化。 Seliciclib（Roscovitine）通过ERK1 / 2 /PPARγ途径在糖尿病大鼠中有效减少肾小管间质纤维化。 Seliciclib（Roscovitine）（16.5 mg / kg）显着降低肿瘤生长速度并增加治疗小鼠的存活率。 引人注目的是，Seliciclib（Roscovitine）治疗导致一只小鼠完全肿瘤消失（25％）; 此外，在完成治疗后5个月，未发现该小鼠的肿瘤再生长。 用Roscovitine和对照小鼠治疗的小鼠之间小鼠体重没有显着差异，两组之间的行为差??异也可以忽略不计。 这些结果表明，Roscovitine可有效用作HPV +头颈癌的选择性肿瘤生长抑制剂
实验参考方法
细胞分析
使用大鼠肾小管上皮细胞（NRK52E）。 CDK5抑制剂Seliciclib（Roscovitine）（Ros .;10μM）和活化剂p35（15μM），PPARγ激动剂Rosiglitazone（Rosi .; 50nM）和ERK1 / 2抑制剂U0126（50nM）用于治疗NRK52E细胞。 每组细胞处理72小时，然后收获进行进一步分析。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
动物实验研究
大鼠
对雄性Sprague Dawley大鼠（6-8周龄）腹膜内注射单次注射稀释于0.1M柠檬酸盐缓冲液pH4.5（糖尿病）或柠檬酸盐缓冲液（非糖尿病）的链脲佐菌素（65mg / kg）。 在注射后三天，使用葡萄糖氧化酶法在葡萄糖分析仪上测定血浆葡萄糖浓度。 葡萄糖水平超过16.7mM的大鼠被认为是糖尿病，因此包括在研究中。 每周测量一次血浆葡萄糖水平。 为了研究CDK5抑制对肾小管间质纤维化的影响，每天向糖尿病大鼠腹膜内注射Roscovitine（25mg / kg）直至处死。 DMSO作为对照包括在内。
小鼠
将指数生长的UMSCC47细胞皮下注射到雌性NUDE小鼠的骶骨区域。 每只小鼠用50％基质胶中的2×105个细胞和100μL体积的50％PBS接种。 在肿瘤达到可测量的大小后，给予小鼠16.5mg / kg剂量的腹膜内Roscovitine或载体注射。监测体重，肿瘤生长和一般行为。 每3天测量肿瘤体积。当肿瘤超过0.5cm 3时，处死小鼠。
