Nilotinib抗肿瘤活性的 Bcr-Abl 酪氨酸激酶抑制剂
2019-04-10 
MCE小分子
Nilotinib是一种口服可用的具有抗肿瘤活性的 Bcr-Abl 酪氨酸激酶抑制剂
体外
新型选择性Abl抑制剂Nilotinib（AMN107）设计用于与BCR-ABL的ATP结合位点相互作用，其亲和力高于伊马替尼。 除了与伊马替尼相比显着更有效（IC50 <30 nM）外，尼罗替尼还能维持对大多数赋予伊马替尼耐药性的BCR-ABL点突变体的活性。 尼罗替尼显示出对抗GIST异种移植物系和伊马替尼抗性GIST细胞系的显着抗肿瘤效力。 亲本细胞系GK1C和GK3C显示伊马替尼敏感性，IC50分别为4.59±0.97μM和11.15±1.48μM。 伊马替尼耐药细胞系GK1C-IR和GK3C-IR显示伊马替尼耐药，IC50值分别为11.74±0.17μM（P <0.001）和41.37±1.07μM（P <0.001）。
体内
对于伊马替尼，肿瘤生长抑制（TGI）的百分比为83.8％，对于GK1X异种移植物系（n.s。）中的尼罗替尼，为69.6％。 在GK2X异种移植物系中，伊马替尼的TGI为83.0％，尼罗替尼为85.3％（n.s.）。 此外，伊马替尼的GK3X异种移植物线TGI为31.1％，尼罗替尼（n.s.）为47.5％。 这些结果表明，除了GK1X异种移植物系外，尼罗替尼显示出与伊马替尼相当或更高的抗肿瘤作用。 尼罗替尼对宏观和微观病理评分具有显着的治愈作用，并确保吲哚美辛诱导的小肠结肠炎大鼠模型中相当大的粘膜愈合。 虽然尼罗替尼降低了结肠中PDGFRα和β水平以及凋亡评分，但它对体重和TNF-α水平没有显着影响。 进一步的实验研究可以为人类提供更明确的证据
实验参考方法
细胞分析
将人GIST细胞系GK1C和GK3C以及伊马替尼抗性细胞系GK1C-IR和GK3C-IR接种于96孔微量培养板中并培养12小时，然后暴露于伊马替尼（1-100μM）或尼罗替尼（1- 100μM）72小时。 通过WST-8测定法定量细胞。 光密度（OD）由Sunrise rainbow确定。 抑制率计算如下：抑制％=（处理组 - 空白的OD）/（对照组 - 空白的OD）×100％。 计算导致50％生长抑制的测试药物浓度（IC50）。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
动物研究
小鼠
使用裸鼠中的GIST异种移植物系GK1X，GK2X和GK3X。 通过在BALB / cSLc-nu / nu小鼠中连续传代来维持这些异种移植物系。 每天用载体或40mg / kg伊马替尼或尼罗替尼治疗携带GK1X，GK2X和GK3X肿瘤（每组6-8只小鼠）的小鼠，持续4周。 根据公式LW2 / 2，根据肿瘤长度（L）和宽度（w）的厚度测量值确定肿瘤体积（TV）。 电视每两到三天以及评估当天确定。 处死小鼠并且如下计算肿瘤生长抑制（TGI）的百分比：TGI（％）= [1-（评估日的治疗组肿瘤体积 - 治疗组肿瘤体积在第1天的平均值）/（平均值） 对照组肿瘤体积对第1天对照组肿瘤体积的评价日均值]]×100。
大鼠
雌性Wistar白化大鼠，体重226-243g（平均体重，241.09g），用于本研究。 以吲哚美辛给药的同一天开始，通过口胃管向Nilotinib组大鼠（n = 7）施用尼罗替尼，以两个分剂量施用20mg / kg / d，持续13天。 在13-d期结束时，在乙醚麻醉下从所有大鼠获得用于病理学检查的血液和组织样品。 然后通过断头处死所有动物。
体外
新型选择性Abl抑制剂Nilotinib（AMN107）设计用于与BCR-ABL的ATP结合位点相互作用，其亲和力高于伊马替尼。 除了与伊马替尼相比显着更有效（IC50 <30 nM）外，尼罗替尼还能维持对大多数赋予伊马替尼耐药性的BCR-ABL点突变体的活性。 尼罗替尼显示出对抗GIST异种移植物系和伊马替尼抗性GIST细胞系的显着抗肿瘤效力。 亲本细胞系GK1C和GK3C显示伊马替尼敏感性，IC50分别为4.59±0.97μM和11.15±1.48μM。 伊马替尼耐药细胞系GK1C-IR和GK3C-IR显示伊马替尼耐药，IC50值分别为11.74±0.17μM（P <0.001）和41.37±1.07μM（P <0.001）。
体内
对于伊马替尼，肿瘤生长抑制（TGI）的百分比为83.8％，对于GK1X异种移植物系（n.s。）中的尼罗替尼，为69.6％。 在GK2X异种移植物系中，伊马替尼的TGI为83.0％，尼罗替尼为85.3％（n.s.）。 此外，伊马替尼的GK3X异种移植物线TGI为31.1％，尼罗替尼（n.s.）为47.5％。 这些结果表明，除了GK1X异种移植物系外，尼罗替尼显示出与伊马替尼相当或更高的抗肿瘤作用。 尼罗替尼对宏观和微观病理评分具有显着的治愈作用，并确保吲哚美辛诱导的小肠结肠炎大鼠模型中相当大的粘膜愈合。 虽然尼罗替尼降低了结肠中PDGFRα和β水平以及凋亡评分，但它对体重和TNF-α水平没有显着影响。 进一步的实验研究可以为人类提供更明确的证据
实验参考方法
细胞分析
将人GIST细胞系GK1C和GK3C以及伊马替尼抗性细胞系GK1C-IR和GK3C-IR接种于96孔微量培养板中并培养12小时，然后暴露于伊马替尼（1-100μM）或尼罗替尼（1- 100μM）72小时。 通过WST-8测定法定量细胞。 光密度（OD）由Sunrise rainbow确定。 抑制率计算如下：抑制％=（处理组 - 空白的OD）/（对照组 - 空白的OD）×100％。 计算导致50％生长抑制的测试药物浓度（IC50）。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
动物研究
小鼠
使用裸鼠中的GIST异种移植物系GK1X，GK2X和GK3X。 通过在BALB / cSLc-nu / nu小鼠中连续传代来维持这些异种移植物系。 每天用载体或40mg / kg伊马替尼或尼罗替尼治疗携带GK1X，GK2X和GK3X肿瘤（每组6-8只小鼠）的小鼠，持续4周。 根据公式LW2 / 2，根据肿瘤长度（L）和宽度（w）的厚度测量值确定肿瘤体积（TV）。 电视每两到三天以及评估当天确定。 处死小鼠并且如下计算肿瘤生长抑制（TGI）的百分比：TGI（％）= [1-（评估日的治疗组肿瘤体积 - 治疗组肿瘤体积在第1天的平均值）/（平均值） 对照组肿瘤体积对第1天对照组肿瘤体积的评价日均值]]×100。
大鼠
雌性Wistar白化大鼠，体重226-243g（平均体重，241.09g），用于本研究。 以吲哚美辛给药的同一天开始，通过口胃管向Nilotinib组大鼠（n = 7）施用尼罗替尼，以两个分剂量施用20mg / kg / d，持续13天。 在13-d期结束时，在乙醚麻醉下从所有大鼠获得用于病理学检查的血液和组织样品。 然后通过断头处死所有动物。
