CEP-33779是一种活性的JAK2抑制剂

　　CEP-33779是一个新颖的，选择性，有口服活性的JAK2抑制剂，IC50值为1.8±0.6 nM。

 

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　　生物活性

 

　　体外研究

 

　　CEP-33779在无毒浓度下，显著提高P-糖蛋白过表达多药耐药细胞对其抗癌底物的过表达敏感性。CEP-33779通过抑制P-糖蛋白转运功能的过表达显著增加细胞内积累并减少阿霉素的流出

 

　　体内研究

 

　　CEP-33779在裸鼠中表现出良好的PK特征，静脉内半衰期为1小时，分布适中(Vd=2.6 L/kg)，并且可测量口服暴露，估计生物利用度为33%。它在CWR22异种移植模型中显示出抗肿瘤功效；以30 mg/kg bid口服给药14天可导致5/10只动物的肿瘤停滞和部分消退。

 

　　CEP-33779给药导致大多数动物的肿瘤几乎完全缩小；少数剩余的肿瘤结节很小，血管化不良，并且具有坏死外观。CEP-33779抑制肿瘤中NF-κB的激活

 

　　实验参考方法

 

　　激酶测定

 

　　度量了通过苏铁病毒表达的人类JAK1、JAK2或JAK3的激酶活性。每个96孔Costar高结合板被涂上100μL/孔的10μg/mL Neutravidin在TBS里，在37°C下进行2小时，接着用100μL/孔的1μg/mL 15-mer肽基质在37°C下进行1小时。激酶测定混合液（总体积=100μL/孔）包括20 mM HEPES(pH 7.2)，ATP(0.2μM ATP对于JAK1和JAK2,和0.1μM ATP对于JAK3),1 mM MnCl2，0.1%BSA，和CEP-33779（在DMSO中稀释，最后在试剂中是2.5%DMSO）被加到试剂板中。添加酶并允许反应在室温下进行20分钟。通过添加100μL/孔稀释的Eu-N1标记PY100抗体来检测磷酸化产品。样本在室温下孵化1小时，然后加入100μL增强溶液。摇动板10分钟，然后测量最终溶液的荧光。确定IC50值。相关产品推荐：Ruxolitinib是JAK1/2 抑制剂

 

　　MCE并未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

 

　　动物给药

 

　　小鼠：携带CWR22异种移植瘤的裸鼠口服给药，药物为CEP-33779，剂量为每公斤55毫克，或者使用载体（PEG400）。在给药后的2、6和24小时，按每组3只的比例对动物进行处死，切除肿瘤并准备血浆样本。使用含有蛋白酶和磷酸酶抑制剂的Triton基础提取缓冲液来准备肿瘤提取物。等量的提取物在SDS-PAGE凝胶上分离，并通过使用特异性抗体进行Western blot以分析STAT3的磷酸化和表达情况。