Trilaciclib是CDK4/6抑制剂

　　Trilaciclib是CDK4/6的抑制剂，对于CDK4和CDK6的IC50值分别为1 nM和4 nM。

 

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　　生物活性

 

　　体外研究

 

　　与Trilaciclib(G1T28)孵育24小时可诱导强烈的G1细胞周期停滞(时间=0)。Trilaciclib清除后16小时，细胞已重新进入细胞周期并表现出与未处理的对照细胞相似的细胞周期动力学。这些结果表明Trilaciclib引起短暂的、可逆的G1停滞。CDK4/6敏感细胞中Trilaciclib介导的瞬时G1细胞周期停滞降低了多种与骨髓抑制相关的常用细胞毒性化疗药物的体外毒性

 

　　体内研究

 

　　Trilaciclib(G1T28)处理可在12小时内对HSPC的增殖产生强烈的剂量依赖性抑制，EdU掺入在给药后24小时内以剂量依赖性方式恢复到接近基线水平。这些数据表明，单次口服剂量的Trilaciclib可以体内以剂量依赖性方式在HSPC中产生可逆的细胞周期停滞。在依托泊苷处理前30分钟给予100 mg/kg Trilaciclib的小鼠仅表现出背景水平的caspase-3/7活性。这些数据表明Trilaciclib可以在体内保护骨髓免受化疗诱导的细胞凋亡。数据表明，在5-FU之前使用Trilaciclib处理可能会减少HSPC中化疗引起的5-FU损伤，从而加速化疗后血细胞计数的恢复相关推荐：Palbociclib帕博西尼

 

　　实验参考方法

 

　　激酶酶活性测定

 

　　使用300 nM Trilaciclib（G1T28）或DMSO（0.1%）处理HS68、WM2664和A2058细胞，孵育4、8、16或24小时。使用含有1×HALT蛋白酶和磷酸酶抑制剂的1×放射免疫共沉淀试剂缓冲液制备全细胞提取物。根据生产商的说明书，使用试剂盒测定总蛋白质浓度。进行Western blot分析时，按照之前的描述处理蛋白质。使用总RB和β-管蛋白的抗体作为负载对照进行评估。

 

　　细胞实验

 

　　将HS68细胞在10、30、100、300、1,000或3,000 nM的Trilaciclib（G1T28）最终浓度下处理24小时。收集并用冰冷甲醇固定细胞。用20μg碘化丙啶和50μg RNAse A在PBS-CMF（无钙镁）+1％BSA中染色固定细胞。样品在Cyan ADP分析仪上处理，并使用软件完成细胞周期分析。相关推荐：Abemaciclib能够抑制CDK4/CDK6的活性

 

　　动物给药

 

　　小鼠

 

　　将雌性裸鼠植入H69细胞，监测直到治疗开始。一旦肿瘤达到可接受大小（150 mm3），小鼠以不同的Trilaciclib（100 mg/kg）和托泊替康组合进行每周5天、连续4周的剂量给药。在治疗后的最多60天内测量肿瘤。在60天之前达到过度肿瘤负担的所有小鼠将被安乐死。使用已建立的方法处理和分析经Trilaciclib盐酸盐和/或托泊替康处理的小鼠血浆中的托泊替康和Trilaciclib水平。

 

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