Adavosertib抑制剂

　　Adavosertib(AZD-1775;MK-1775)是一种有效的Wee1抑制剂，IC50值为5.2 nM。

 

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　　Adavosertib抑制剂的生物活性

 

　　体外研究

 

　　Adavosertib(MK-1775)增强5-FU在p53缺陷型人结肠癌细胞中的细胞毒性作用。Adavosertib(MK-1775)抑制细胞中的CDC2 Y15磷酸化，消除由5-FU诱导的DNA损伤检查点，并导致通过诱导组蛋白H3磷酸化确定的有丝分裂过早进入。

 

　　Adavosertib(MK-1775)可消除p53缺陷细胞中辐射诱导的G2阻滞，但不会消除p53野生型细胞系。

 

　　在p53缺陷型肿瘤中，NSC 613327与Adavosertib(MK-1775)的组合产生强大的抗肿瘤活性，并且与NSC 613327处理相比显著增强肿瘤消退反应(4.01倍)。

 

　　体内研究

 

　　在体内，Adavosertib(MK-1775)在可耐受剂量下增强5-FU的抗肿瘤功效。

 

　　实验参考方法

 

　　细胞试验

 

　　用含有50 mM HEPES(pH 7.9)、0.4 mol/L NaCl和1 mM EDTA的裂解液从细胞颗粒中提取总蛋白，并用10µL/mL磷酸酶抑制剂混合物1、10µL/mL磷酸酶抑制剂混合物2、10µL/mL蛋白酶抑制剂和1%NP-40强化。裂解物的蛋白质浓度由Bio-Rad蛋白测定法测定。等量的蛋白质通过12%SDS-PAGE分离并转移到Immobilon膜上。膜上的非特异性结合位点在5%脱脂牛奶中被阻断，在Tris(20 mM)-缓冲盐水(150 mM,pH 7.4)中加入0.1%TBS-T。通过将膜与一抗在5%脱脂干牛奶中4°C孵育过夜，然后在适当的过氧化物酶偶联二抗中孵育45分钟，检测蛋白质信号。然后在台风9400扫描仪上用ECL加Western印迹检测试剂增强化学发光显影膜。

 

　　MCE尚未独立证实这些方法的准确性。仅供参考。

 

　　动物实验方法

 

　　通过10µL 1×106 Calu-6细胞的免疫接种，在腿部产生肿瘤异种移植物。当肿瘤直径达到8mm时开始照射和Adavosertib(MK-1775)治疗，持续5天。使用由两个平行相对的137Cs源组成的小型动物辐照器，以5 Gy/min的剂量率将伽马射线局部递送到未麻醉小鼠的肿瘤腿部。肿瘤每天照射两次，间隔6小时。Adavosertib(MK-1775)在第一次每日照射剂量前1小时和后2小时以0.1 mL体积灌胃。