尼拉帕尼对苯甲磺酸盐Niraparib tosylate

　　Niraparib tosylate (MK-4827 tosylate) 是一种高效的，具有生物口服利用度的 PARP1 和 PARP2 抑制剂，IC50 分别为 3.8 和 2.1 nM。Niraparib tosylate 抑制 DNA 损伤修复，诱导凋亡 (apoptosis) 并具有抗肿瘤活性。

 

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　　尼拉帕尼对苯甲磺酸盐Niraparib tosylate的生物活性

 

　　体外研究

 

　　Niraparib (MK-4827) 在全细胞试验中抑制 PARP 活性，EC50=4 nM 和 EC90=45 nM。MK-4827 抑制突变体 BRCA-1 和 BRCA-2 癌细胞的增殖，CC50 在 10-100 nM 范围内。MK-4827 在全细胞试验中表现出出色的 PARP 1 和 2 抑制作用，IC50 分别为 3.8 和 2.1 nM。

 

　　为了验证 Niraparib (MK-4827) 在这些细胞系中抑制 PARP，A549 和 H1299 细胞用 1 μM Niraparib (MK-4827) 处理不同时间，并使用化学发光测定法测量 PARP 酶活性。结果表明，Niraparib (MK-4827) 在处理后 15 分钟内抑制 PARP，A549 细胞在 1 小时达到约 85% 的抑制，H1299 细胞在 1 小时达到约 55% 的抑制。

 

　　体内研究

 

　　Niraparib (MK-4827) 具有良好的耐受性，并在 BRCA-1 缺陷癌症的异种移植模型中显示出作为单一药物的疗效。Niraparib (MK-4827) 在体内具有良好的耐受性，并且在 BRCA-1 缺陷癌症的异种移植模型中显示出作为单一药物的疗效。Niraparib (MK-4827) 在大鼠中的药代动力学可接受，血浆清除率为 28 (mL/min)/kg，分布容积非常高 (Vdss=6.9 L/kg)，长末端半衰期 (t1/2=3.4 h)，生物利用度极佳，F=65%。

 

　　Niraparib (MK-4827) 在两种情况下均增强 p53 突变体 Calu-6 肿瘤的放射反应，单次每日剂量 50 mg/kg 比每日两次 25 mg/kg 更有效。

 

　　实验参考方法

 

　　细胞试验

 

　　使用HT通用化学发光PARP Assay Kit对A549和H1299细胞中的PARP抑制作用进行分析。简要地说，细胞经DMSO或1 μM Niraparib (MK-4827)处理15、30、60或120分钟后，用胰蛋白酶消化并转移到预冷的离心管中。细胞用冰冷PBS洗涤两次，然后在冷的PARP提取缓冲液中重悬。悬液在冰上孵育30分钟，并定期振荡以破坏细胞膜。然后将悬液离心，上清转移到冰上的预冷离心管中。96孔板的组织蛋白包被孔在1X PARP缓冲液中复水，并在室温下孵育30分钟。去除PARP缓冲液，然后向每个孔中加入20 μg的蛋白质（通过Bio-Rad蛋白质测定确定），然后加入稀释的PARP-HSA酶和1X PARP缓冲液。接着，在室温下孵育60分钟，用含有0.1% Triton X-100的PBS洗涤两次，然后用PBS洗涤。向条纹孔中加入稀释的Strep-HRP，并在室温下孵育60分钟。然后再次进行洗涤，方法同上。将PeroxyGlow A和B等体积相等的液体混合，并加入孔中，使用读板仪立即获取化学发光读数

 

　　动物实验

 

　　小鼠

 

　　当肿瘤直径达到6.0毫米时，将雌性裸小鼠（Ncr Nu/Nu）随机分配到包含5到8只小鼠的治疗组中，然后开始使用MK-4827进行治疗。MK-4827以每公斤25毫克两次每天或者每公斤50毫克一次每天的剂量给予，持续21天，或在肿瘤直径达到8毫米后的第9天停止给药。当肿瘤直径达到8.0毫米（7.7-8.2毫米）时，进行分割的局部肿瘤放射疗法（XRT）。每天连续14天或两次每天连续7天，向携带肿瘤的小鼠的腿部输送辐射（每次2格雷），使用由两个平行对向的137Cs源组成的小动物照射装置，剂量速率为5格雷/分钟。在放射治疗期间，未麻醉的小鼠被机械固定在夹具中，使肿瘤位于直径为3.0厘米的辐射场中心，并且动物的身体被屏蔽以免受辐射暴露。在同时给予MK-4827和放射治疗的那天，药物在当天第一次辐射剂量前1小时给予。