Axitinib阿昔替尼

　　Axitinib是多靶点的酪氨酸激酶抑制剂，抑制 VEGFR1，VEGFR2，VEGFR3， PDGFRβ 的 IC50 值分别为 0.1, 0.2, 0.1-0.3, 1.6 nM。

 

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　　Axitinib阿昔替尼的生物活性

 

　　体外研究

 

　　Axitinib (AG-013736) 是一种有效的选择性 VEGFR 1 至 3 抑制剂。在转染或内源性 RTK 表达细胞中，Axitinib 有效阻断生长因子刺激的 VEGFR-2 和 VEGFR-3 磷酸化，平均 IC50 值分别为 0.2 和 0.1 至 0.3 nM。基于 Axitinib 的蛋白结合，针对 VEGFR-1 的细胞活性为 1.2 nM (在存在 2.3% 牛血清白蛋白的情况下测量)，相当于绝对 IC50 ~0.1 nM。在 Flk-1 转染的 NIH-3T3 细胞中针对鼠 VEGFR-2 (Flk-1) 的效力为 0.18 nM，与其人类同系物相似。Axitinib 对密切相关的 III 型和 V 型家族 RTK，包括 PDGFR-β (1.6 nM)、KIT (1.7 nM) 和 PDGFR-α，显示出约 8 至 25 倍的 IC50 (5 nM)；纳摩尔浓度的 Axitinib 可阻断 PDGF BB 介导的人神经胶质瘤 U87MG 细胞 (PDGFR-β 阳性) 迁移，但不会阻断增殖。

 

　　体内研究

 

　　与对照肿瘤相比，单次口服剂量的 Axitinib (100 mg/kg) 显著抑制小鼠 VEGFR-2 磷酸化长达 7 小时。Axitinib 快速抑制 VEGF 诱导的小鼠皮肤血管通透性；这种抑制是剂量依赖性的，并且与小鼠体内的药物浓度直接相关。药代动力学/药效学分析表明未结合的 EC50 为 0.46 nM。在没有外源性 VEGF-A 刺激的 MV522 荷瘤小鼠的皮肤中也显示出类似的抑制作用。Axitinib 抑制小鼠人异种移植肿瘤的生长。无论初始肿瘤大小、模型类型或植入部位如何，阿西替尼都会产生剂量依赖性生长延迟。

 

　　实验参考方法

 

　　细胞检测

 

　　内皮细胞或肿瘤细胞在1% FBS（HUVEC）或0.1% FBS（肿瘤细胞）的存在下被饥饿处理18小时。添加Axitinib，并在37°C下与1mM Na3VO4共同孵育45分钟。将适当的生长因子加入细胞中，在5分钟后，用冷PBS洗涤细胞，并用溶解缓冲液和蛋白酶抑制剂混合液中裂解细胞。将裂解物于4°C下与免疫沉淀抗体一起孵育过夜。抗体复合物与蛋白A珠结合，上清液通过SDS-PAGE分离。

 

　　动物给药

 

　　小鼠和大鼠

 

　　携带M24met异种移植瘤的小鼠（400-600 mm3）接受单剂量的Axitinib或对照组（0.5% 羧甲基纤维素/水）。采集血液和肿瘤组织样本以进行药代动力学和VEGFR-2测量。使用布拉福德比色法确定肿瘤组织中的总蛋白浓度。

 

　　六天龄的Sprague-Dawley大鼠接受两次i.p.注射Axitinib（30 mg/kg）。动物被牺牲，收集视网膜并裂解，进行免疫沉淀/免疫印迹实验。使用ECL-Plus进行检测，并使用Alpha Imager 8800进行密度分析。

 

　　MCE尚未独立确认这些方法的准确性，仅供参考。