比美替尼Binimetinib抑制剂

　　Binimetinib (MEK162) 是口服和选择性的 MEK1/2 抑制剂， Binimetinib (MEK162) 抑制 MEK，IC50 为 12 nMIC50。

 

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　　比美替尼Binimetinib抑制剂的生物活性

 

　　体外研究

 

　　MCF7细胞中，RSK3或RSK4的表达会降低对任何PI3K抑制剂单独处理的反应。然而，将PI3K抑制剂与Binimetinib（MEK162）或BI-D1870结合使用可以完全逆转RSK表达细胞的耐药性[2]。Binimetinib（MEK162）可以阻断所有HRAS突变细胞系中基础ERK磷酸化的过程。RAD001和AZD6244/MEK162的联合应用使S6激酶的抑制作用比单独使用RAD001在Western blot上更强。RAD001和AZD6244/MEK162的联合应用还导致HRAS突变细胞中细胞生长的更强阻断效果，强于单独使用这两种药物。Binimetinib（MEK162）与RAD001之间显示出比与AZD6244更强的协同作用[3]。

 

　　MCE尚未独立确认这些方法的准确性。仅供参考。

 

　　体内实验

 

　　以用药方式，Binimetinib（ARRY-438162）以剂量相关方式降低了动物模型中疾病的严重程度。在CIA模型中，ARRY-438162以1和3 mg/kg的剂量抑制了踝关节直径的增加27%和50%，而Ibuprofen则有46%的抑制作用。当与Ibuprofen联合使用时，这两个剂量分别产生74%和72%的抑制效果。对踝关节进行显微镜检查显示，Binimetinib（ARRY-438162）在1和3 mg/kg剂量下显著抑制病变（炎症、软骨损伤、滑膜形成和骨吸收），抑制率分别为32%和60%，而仅使用Ibuprofen的抑制率为17%，与对照组无显著差异。当这两个剂量的Binimetinib（ARRY-438162）与ibuprofen联合使用时，关节破坏的抑制率为54%和77%。在AIA模型中，3和10 mg/kg的Binimetinib（ARRY-438162）分别抑制了AIA踝关节直径的11%和34%，而MTX则有33%的抑制作用。当与MTX联合使用时，3和10 mg/kg的Binimetinib（ARRY-438162）分别导致55%和71%的抑制。对炎症和骨吸收的踝关节进行显微镜检查也显示出与单独使用药物相比，双联合疗法的疗效更好[1]。当Binimetinib（MEK162）与BEZ235联合使用时，观察到肿瘤生长的显著减少（P=0.01）。这种增强的抗肿瘤活性伴随着ERK和S6的磷酸化程度的降低。直接受mTOR活性调控的磷酸化4EBP1没有明显变化[2]。

 

　　比美替尼Binimetinib抑制剂的实验参考方法

 

　　细胞试验

 

　　MCF7细胞实验中，根据指示将感染的细胞播种在12孔板中（2×104个细胞）。24小时后，细胞分别与BEZ235（100或200 nM）、BKM120（0.75或1 μM）、GDC-0941（1 μM）或MK2206（2 μM）单独处理，或与Binimetinib（MEK162）（1 μM）、BI-D1870（10 μM）或AZD6244（1 μM）联合处理。通过使用4%戊二醛或甲醇固定细胞，在H2O中洗涤细胞两次，并用0.1%结晶紫染色细胞来定量细胞数量。然后使用10%乙酸提取染料，并测定其吸光度（570 nm）。生长曲线以三重复实施。使用CellTiter-Glo进行细胞存活率检测，将2,000个细胞种植在96孔板中，在添加药物后4至5天进行检测。通过流式细胞术定量分析细胞周期和低二倍体凋亡细胞。简而言之，用PBS洗涤细胞，冷藏70%乙醇固定细胞，同时处理RNase时用丙啶碘化物染色。使用FACScalibur细胞仪和Cell Quest软件对亚G1期细胞进行定量分析。

 

　　动物实验

 

　　小鼠

 

　　使用六周大的雌性无胸腺裸鼠Foxn1nu。小鼠每天通过口服给药接受安慰剂、BEZ235、BKM120、MK-2206或Binimetinib（MEK162）的处理。BEZ235（25-30 mg/kg，6IW [6天断1天]）和BKM120（30 mg/kg，6IW）溶解在10% NMP-90% PEG中，新配制并在30分钟内给予。MK-2206（100 mg/kg，3IW）溶解在30% Captisol中，Binimetinib（MEK162）（6 mg/kg，BID）溶解在0.5% Tween-80，1%羧甲基纤维素中。对于肿瘤生长研究，根据异种移植模型和治疗方案的不同，将小鼠治疗7-24天。肿瘤异位移植物每周测量3次，使用以下公式确定肿瘤体积：(长度×宽度^2)×(π/6)。实验结束后，动物用1.5%异氟醚-空气混合物麻醉，并通过颈椎脱臼处死。最后一次给药后2小时取出肿瘤。

 

　　大鼠

 

　　使用大鼠胶原诱导性关节炎（CIA）和佐剂诱导性关节炎（AIA）模型来确定亚急性炎症环境中的疗效。在CIA研究中，使用二型胶原注射诱导已建立的疾病的鼠类，连续六天用0.3、1或3 mg/kg ARRY-438162（PO，BID）进行治疗，同时联合使用30 mg/kg布洛芬（PO，QD）。通过体重和踝关节直径监测第0-7天的疾病进展。AIA模型是通过注射脂质来诱发的。

 

　　MCE尚未独立确认这些方法的准确性。仅供参考。