Trametinib曲美替尼抑制剂

　　Trametinib (GSK1120212; JTP-74057) 是口服有效的 MEK 抑制剂，抑制 MEK1 和 MEK2 的 IC50 分别为 2 nM。Trametinib 可以激活自噬 (autophagy)，诱导凋亡 (apoptosis)。

 

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　　Trametinib曲美替尼抑制剂的生物活性

 

　　体外研究

 

　　Trametinib (GSK1120212；JTP-74057) (0.1-100 nM) 阻断外周血单核细胞 (PBMC) 中肿瘤坏死因子-α 和白细胞介素 6 的产生。Trametinib (JTP-74057) 抑制 10 种人结直肠癌细胞系中的 9 种的生长，并且它们在药物处理后显示细胞周期停滞在 G1 期。

 

　　GSK2118436 和 Trametinib (GSK1120212) 的组合有效抑制细胞生长，降低 ERK 磷酸化，减少细胞周期蛋白 D1 蛋白，并增加耐药克隆中的 p27 (kip1) 蛋白。

 

　　体内研究

 

　　佐剂性关节炎 (AIA) 和 II 型胶原性关节炎 (CIA) 的发展几乎完全被 0.1 mg/kg 的 Trametinib (GSK1120212;JTP-74057) 或 10mg /kg HWA486 抑制。

 

　　Trametinib (0.3 mg/kg，1 mg/kg，po) 在裸鼠异种移植模型中有效抑制 HT-29 异种移植物的生长。

 

　　实验参考方法

 

　　激酶试验

 

　　将非磷酸化的髓鞘碱性蛋白(MBP)包被在ELISA板上，将活性形式的B-Raf/c-Raf与未磷酸化的MEK1/MEK2和ERK2混合在10?M ATP和12.5 mM含MOPS缓冲液的MgCl2中，存在不同浓度的Trametinib (JTP-74057)。通过抗phosphombp抗体检测MBP的磷酸化。在10?M ATP下测试了对总共99种激酶的抑制活性。

 

　　细胞试验

 

　　细胞用不同浓度的曲美替尼(JTP-74057)在100 mm培养皿中处理3或4天。收集漂浮细胞和贴壁细胞，用70%乙醇固定。PBS洗涤后，细胞悬浮于100?L/mL RNase和25?L/mL碘化丙啶(PI)中，37℃黑暗孵育30 min。使用流式细胞仪Cytomics FC500或Guava EasyCyte plus测定每个单细胞的DNA含量。

 

　　动物实验

 

　　小鼠

 

　　使用雌性BALB/c-nu/nu小鼠。第0天，分别以5×106 cells/100?L/site或1×106 cells/100?L/site的浓度将HT-29细胞或COLO205细胞悬浮在冰冷的HBSS(-)中皮下接种于小鼠右侧。醋酸溶剂形式的曲美替尼(JTP-74057, 0.3 mg/kg, 1 mg/kg)溶解于10% cremoophor EL-10% PEG400中，从平均肿瘤体积达到100 mm3之日起，每天口服1次，连续14天。开始给药后，每周两次用微规测量肿瘤长度[L(mm)]和宽度[W(mm)]，计算肿瘤体积，计算公式为:肿瘤体积(mm3)=L×W×W/2。

 

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