Retaspimycin Hydrochloride

　　Retaspimycin Hydrochloride是有效的 Hsp90 抑制剂，EC50 为119 nM。

 

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　　Retaspimycin Hydrochloride的生物活性

 

　　体外研究

 

　　Retaspimycin Hydrochloride (IPI-504) 是一种新型且高度可溶的 17AAG 类似物，是一种 Hsp90 抑制剂。在未处理的 U266 和 MM.1s 细胞以及衣霉素 (Tm) 处理的细胞中，Retaspimycin Hydrochloride 可以消除未折叠蛋白反应元件 (UPRE) 和 ERSE 驱动的荧光素酶活性。Retaspimycin Hydrochloride 抑制报告基因活性的 IC50 在 U266 中为 196±56 nM，在 MM.1s 中 UPRE-luc 活性为 472±177 nM，ERSE-为 213±140 nM MM.1s 细胞中的驱动活动。Retaspimycin Hydrochloride 处理导致 p50ATF6 呈剂量依赖性降低，EC50 为 237 nM，这与报告基因测定一致。在 Retaspimycin Hydrochloride 存在的情况下，sXBP1 的水平降低，表观 EC50 介于 300 nM 和 1 μM之间。Retaspimycin Hydrochloride (IPI-504) 的孵育可有效抑制敏感细胞和曲妥珠单抗耐药细胞中的 Akt 和 MAPK 磷酸化。Akt 的总水平在所有 4 种细胞系 (BT474、SKBR-3、HCC1569 和 HCC1569) 中均呈剂量依赖性下降。然而，Retaspimycin Hydrochloride 处理后总 MAPK 的水平没有显著改变。

 

　　体内研究

 

　　Retaspimycin Hydrochloride (IPI-504) 和曲妥珠单抗独立诱导曲妥珠单抗敏感的 BT474 细胞衍生异种移植物的肿瘤消退。来自 BT474R 细胞的异种移植物在曲妥珠单抗存在下继续生长，但仍然对 Retaspimycin Hydrochloride敏感。当组合使用时，Retaspimycin Hydrochloride 和曲妥珠单抗仅增加 Retaspimycin Hydrochloride 单一疗法的边际效益。Retaspimycin Hydrochloride (100 mg/kg) 作为单一药物在抑制 HCC1569 异种移植物中的肿瘤生长方面比曲妥珠单抗更有效。该组合并不显著优于作为单一药物使用的 Retaspimycin Hydrochloride。

 

　　实验参考方法

 

　　细胞试验

 

　　Hela细胞在Dulbecco改良Eagle培养基中培养，培养基中含有10%胎牛血清、1 ug/mL链霉素和1 ug/mL青霉素。U266和mM .1s在含有15%胎牛血清、1 mM丙酮酸、1 ug/mL链霉素和1 ug/mL青霉素的RPMI 1640培养基中培养。所有细胞系在加湿5% CO2的环境中保持在37°C。使用重要的线粒体功能染色Alamar Blue进行活力研究。细胞在96孔板(200 μL)±Retaspimycin Hydrochloride中孵育后，加入20 μL Alamar Blue, 37℃孵育4-6 h。在λEM=544 nm和λEM=590 nm处使用Envision平板阅读器监测Alamar Blue还原。对药物处理细胞与载体处理细胞的比值进行量化，并根据药物浓度绘制EC50值。使用Caspase Glow kit检测Caspase-3和Caspase- 7活性。

 

　　MCE尚未独立证实这些方法的准确性。仅供参考。

 

　　动物实验

 

　　小鼠

 

　　在所有实验中，每个实验条件下，将2×107细胞注射到10只小鼠的右侧。已确定的肿瘤用曲妥珠单抗、利阿霉素或联合治疗如下:曲妥珠单抗(无菌PBS中10mg /kg)或无菌PBS(对照)每周腹腔注射两次。瑞塔霉素(100 mg/kg)每周腹腔注射3次。再阿斯匹菌、曲妥珠单抗和联合治疗是耐受的。在治疗组中没有发现明显的毒性。肿瘤生长用数字卡尺测量，肿瘤体积用公式(length×width2)×(π/6)确定。实验结束时，用1.5%异氟烷-空气混合物麻醉动物，颈椎脱臼致死。结果用肿瘤体积±SE表示。

 

　　MCE尚未独立证实这些方法的准确性。仅供参考