Mirdametinib是MEK抑制剂

　　Mirdametinib (PD0325901) 是一种具有口服活性，选择性和非 ATP 竞争性的 MEK 抑制剂，IC50 为 0.33 nM。Mirdametinib 对活化的 MEK1 和 MEK2 的 Kiapp 值为 1 nM。Mirdametinib 抑制 p-ERK1/2 的表达并诱导细胞凋亡 (apoptosis)。Mirdametinib 对多种人类肿瘤异种移植物具有抗癌活性。

 

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　　生物活性

 

　　体外研究

 

　　Mirdametinib (PD325901;0.0064、0.032、0.16、0.8、4、20、100 nM;GC50分别为11 nM和6.3 nM，抑制甲状腺乳头状癌(PTC)细胞系(TPC-1细胞和K2细胞)的生长。

 

　　Mirdametinib(100 nmol/L;(4 d)诱导K2细胞(顶部)或TPC-1细胞凋亡。

 

　　Mirdametinib(0.1,1,10,100,1000 nM;在K2细胞(上)或TPC-1细胞中抑制p-ERK1/2的表达。

 

　　Mirdametinib可以阻止黑色素瘤细胞系的生长。Mirdametinib在极低浓度(10 nM)下可显著抑制BRAF突变PTC细胞的生长。

 

　　体内研究

 

　　Mirdametinib(25mg /kg, p.o)在给药后24小时抑制ERK磷酸化50%以上。Mirdametinib(25mg /kg/天;po)产生70%的完全肿瘤反应发生率(C26模型)。

 

　　Mirdametinib(20- 25mg /kg/天;口服填喂法;(连续5天/周))完全抑制了携带BRAF突变(K2)的PTC细胞接种小鼠的肿瘤生长，并显著降低了6 ~ 8周龄胸腺Ncr-nu/nu小鼠中携带RET/PTC1重排(TPC-1)的PTC细胞接种小鼠的肿瘤生长。

 

　　实验参考方法

 

　　激酶试验

 

　　在含有p44MAP激酶(GST-MAPK)的谷胱甘肽s -转移酶融合蛋白(GST-MAPK)和含有p45MEK (GST-MEK)的谷胱甘肽s -转移酶蛋白存在的情况下，测定32P进入髓鞘碱性蛋白(MBP)的情况。检测溶液含有20 mM HEPES, pH 7.4, 10 mM MgCl2, 1 mM MnCl2, 1 mM EGTA, 50 mM [γ -32P]ATP, 10 mg GST-MEK, 0.5 mg GST-MAPK和40 mg MBP，最终体积为100 mL。加入三氯乙酸，20分钟后停止反应，通过GF/C过滤垫过滤。过滤垫上保留的32P使用1205 betatplate测定。PD0325901在不同剂量范围内进行评估，以确定剂量响应曲线。

 

　　细胞试验

 

　　PTC细胞(1×104)接种于24孔板中，加入1ml培养基，在37°C培养箱中培养4天。在第0天将不同浓度的MEK抑制剂PD0325901一式三份添加到细胞中。在第2天将MTT溶于5 mg/mL的0.8% NaCl溶液中(0.2 mL)加入每孔中检测GC50或每天检测细胞生长曲线。细胞用MTT在37℃下孵育3小时。然后将液体从井中吸出并丢弃。将染色的细胞溶解在0.5 mL DMSO中，使用Synergy HT多重检测微孔板读取器测量其在570 nm处的吸收。对于GC50，计算细胞生长为100×(T?T0)/(C?T0)，其中T为经过抑制剂处理的孔在48小时后的光密度，T0为时间0时的光密度，C为仅用DMSO处理的对照光密度。

 

　　动物实验

 

　　用鸡尾酒麻醉小鼠(每组10-14只)。将表达荧光素酶的逆转录病毒稳定感染的K2和TPC-1细胞(5×105细胞在5 μL RPMI1640培养基中)接种于甲状腺，用Xenogen软件使用Living Image 3.0软件每周监测小鼠的肿瘤生长情况。接种1周后，将PD0325901超声溶解于80 mM柠檬酸缓冲液(pH 7)中，每天灌胃(20-25 mg/kg)，连续3周(连续5天/周)。小鼠仅因肿瘤负荷或体重减少20%而被处死。用卡尺测量肿瘤大小，用公式(V=length×width×depth)计算肿瘤体积(V)。对照小鼠单独给予80 mM柠檬酸缓冲液(pH 7)。所有的体内实验都至少要做两次。

 

　　MCE尚未独立证实这些方法的准确性。仅供参考。