Pazopanib是多靶点抑制剂

　　Pazopanib （GW786034） 是多靶点抑制剂，抑制 VEGFR1，VEGFR2，VEGFR3，PDGFRβ，c-Kit，FGFR1，c-Fms的IC50分别为10，30，47，84，74，140，146 nM。

 

　　MCE 的所有产品仅用作科学研究或药证申报，我们不为任何个人用途提供产品和服务

 

　　生物活性

 

　　体外研究

 

　　Pazopanib 显示出对所有人类 VEGFR 受体的良好效力，对 VEGFR-1、-2 和-3 的 IC50 分别为 10、30 和 47 nM。还观察到对密切相关的酪氨酸受体激酶 PDGFRβ、c-Kit、FGF-R1 和 c-fms 的显著活性，IC50 分别为 84、74、140 和 146 nM。在细胞试验中，除了抑制 VEGF 诱导的 HUVEC 增殖外，Pazopanib 还有效抑制 VEGF 诱导的 HUVEC 细胞中 VEGFR-2 的磷酸化，IC50 约为 8 nM。Pazopanib 在大鼠、狗和猴子中具有良好的药代动力学，分别在 10、1 和 5 mg/kg 时具有低清除率 （1.4-1.7 mL/min/kg） 和良好的口服生物利用度 （72%、47%、65%）。除了 2C9 （7.9 μM） 外，细胞色素 P450 谱也得到改善，对测试的同工酶的抑制 >10 μM。

 

　　MCE尚未独立证实这些方法的准确性。仅供参考。

 

　　体内研究

 

　　用 100 mg/kg 的 Pazopanib 处理小鼠，每天两次，持续 5 天，导致血管形成程度的显著抑制。使用 HT29 （结肠癌）、A375P （黑色素瘤） 和 HN5 （头颈癌） 肿瘤后，在携带已建立的人异种移植物 （200?250 mm3） 的小鼠中检查 Pazopanib 的抗血管生成活性标准的三周疗程。与 A375P 模型相比，HN5 和 HT29 异种移植物在所有剂量下的反应都更好，A375P 模型历来对 VEGFR-2 抑制剂具有更强的耐药性。作为支持观察到的异种移植物生长抑制是通过抗血管生成而非抗肿瘤机制发挥作用的证据，在低于 10 μM 的浓度下未观察到 Pazopanib 对这些在含血清培养基中生长的人类肿瘤细胞系 （HT29、HN5、A375P） 的抗增殖活性。未观察到对小鼠体重的显著影响，并且在整个研究期间动物看起来健康且活跃。相关推荐：PP58是Src抑制剂

 

　　Pazopanib 滴眼液组粘附的白细胞数量低于未处理的糖尿病动物，高于健康动物。粘附在健康动物视网膜脉管系统上的平均白细胞为 37.2±7.8，而糖尿病动物的平均值为 102±15.6，比健康动物高约 3 倍。用 0.5 % w/v Pazopanib 混悬液处理的动物在其视网膜血管系统中粘附了 69.5±9.5 个白细胞，这明显低于糖尿病动物。

 

　　MCE尚未独立证实这些方法的准确性。仅供参考。

 

　　实验参考方法

 

　　激酶试验

 

　　采用纯化的杆状病毒表达谷胱甘肽- s-转移酶（GST）融合蛋白编码人类VEGFR受体激酶1、2或3的催化c端，在384孔微滴板上以均匀的时间分辨荧光（htf）格式进行VEGFR酶检测。将10 μL活化的VEGFR2激酶溶液[终浓度，1 nM酶在0.1 M 4-（2-羟乙基）-1-哌嗪乙磺酸（HEPES）中，pH为7.5，含0.1 mg/mL牛血清白蛋白（BSA）， 300 μM二硫硫糖醇（DTT）]加入10 μL底物溶液[终浓度，360 nM肽，（生物素-氨基己基- eeeeyfelvakkkk - nh2）， 75 μM ATP, 10 μM MgCl2]和1 μL滴定化合物在DMSO中引起反应。室温下孵育60 min，加入20 μL 100 mM乙二胺四乙酸（EDTA）猝灭反应。猝灭后，加入20 μL htf试剂（终浓度为15 nM链亲素联异藻蓝蛋白，1 nM铕标记抗磷酸酪氨酸抗体，用0.1 mg/mL BSA稀释，0.1 M HEPES, pH 7.5），孵育至少10 min。用Wallac Victor板读板仪测量665 nM处的荧光，延时50 μs。

 

　　MCE尚未独立证实这些方法的准确性。仅供参考。

 

　　细胞试验

 

　　使用市售试剂盒，采用5-溴-2-脱氧尿苷（BrdU）掺入法测定Pazopanib对细胞增殖的影响。HUVEC在含有5%胎牛血清（FBS）的培养基中接种于1型胶原包被的96孔板中，在37°C, 5% CO2条件下孵育过夜。从细胞中抽吸培养基，在无血清培养基中加入不同浓度的Pazopanib到每孔中。30min后，在孔中加入VEGF （10 ng/mL）或bFGF （0.3 ng/mL）。细胞再孵育72 h，在孵育的最后18 ~ 24 h加入BrdU （10 μM）。在孵育结束时，用ELISA检测BrdU在细胞中的掺入情况。数据用方程描述的曲线拟合，y=Vmax（1?（x/（K+x））），其中K等于IC50。

 

　　MCE尚未独立证实这些方法的准确性。仅供参考。

 

　　动物实验方法

 

　　小鼠

 

　　在8 ~ 12周龄裸鼠体内注射肿瘤细胞悬液诱发肿瘤。当肿瘤体积达到100 ~ 200 mm3时，将小鼠随机分为8组。帕唑帕尼每天给药1次或2次，剂量分别为10、30或100 mg/kg。在研究结束时，动物被吸入二氧化碳安乐死。肿瘤体积每周用卡尺测量两次，使用公式：肿瘤体积（mm3）=（length×width2）/2。结果通常报告为%抑制率=1?（药物处理群体的平均增长/载体处理对照群体的平均增长）。

 

　　大鼠

 

　　雄性棕色-挪威（BN;体重200至250 g的色素大鼠在任何实验程序之前至少适应两天。禁食12-16小时后，腹腔注射链脲佐菌素溶液30 mg/mL，加入10 mM柠檬酸缓冲液（pH 4.5） （60 mg/kg体重）诱导糖尿病。注射链脲佐菌素后3 ~ 4 h，饲喂常规饲料，注射后24 h，尾静脉采血（5 ~ 10 μL）。动物的血糖水平是用血糖监测器测定的。血糖水平超过250毫克/分升的动物被认为是糖尿病。这些动物被分成三组。组1:健康（n=12），组2:糖尿病（n=12），组3:糖尿病+治疗（n=12）。糖尿病诱导后立即开始治疗。用0.5% w/v Pazopanib混悬液（每只眼10 μL体积）每天给药2次，连续30天，各组动物于第31天、第30天末次给药后16-17 h处死。

 

　　MCE尚未独立证实这些方法的准确性。仅供参考。