Cyclosporin A
2019-03-27 
MCE小分子
Cyclosporin A 是一种免疫抑制剂，能与亲环素结合，抑制 calcineurin 活性的IC50 值为 7 nM。
MCE 的所有产品仅用作科学研究，我们不为任何个人用途提供产品和服务
Cyclosporin A生物活性
体外
环孢菌素A能够与T细胞中的亲环蛋白结合。 环孢菌素A通过形成亲环蛋白 - 环孢菌素A复合物来抑制神经钙蛋白。 环孢菌素A对钙调神经磷酸酶具有抑制作用，IC50为7 nM 。 环孢菌素A抑制NF-AT的核转位。 环孢菌素A通过阻止MTP打开显示对线粒体的影响，IC50为39 nM 。
体内
环孢菌素A具有免疫抑制活性，并且通过肠胃外和口服活性。 小鼠，大鼠和豚鼠的给药。 环孢菌素A可用于器官移植以防止排斥
Cyclosporin A的溶剂和溶解度
体内：
1、逐个加入每种溶剂：10％DMSO 》90％玉米油
溶解度：≥2.08mg / mL（1.73 mM）; 明确解决方案
2、逐个添加每种溶剂：10％DMSO 》40％PEG300 》5％Tween-80 》45％盐水
溶解度：2.08 mg / mL（1.73 mM）; 暂停解决方案; 需要超声波
实验参考方法
Cyclosporin A激酶测定
与纯化酶的反应混合物含有100 nM钙调神经磷酸酶，100 nM钙调蛋白和5μM32P标记的磷酸肽，在60μL（总体积）的含有20 mM Tris（pH 8），100 mM NaCl，6 mM MgCl 2,0.5的分析缓冲液中 mM二硫苏糖醇，每毫升0.1mg牛血清白蛋白，和0.1mM CaCl 2或5mM EGTA。 与细胞裂解物的反应混合物含有20μL未稀释的裂解物，5μM32P标记的磷酸肽和40μL测定缓冲液。 反应混合物含有50μM肽412或413和/或500nM冈田酸，磷酸酶1和2A的特异性抑制剂; 500nM冈田酸足以抑制Ca2 +非依赖性磷酸酶，而较高浓度也部分抑制Ca2 +依赖性磷酸酶活性。 在30℃下15分钟后，通过加入0.5mL含有5％三氯乙酸的100mM磷酸钾缓冲液（pH7.0）终止反应。 通过Dowex阳离子交换色谱法分离游离无机磷酸盐，并如所述通过闪烁计数进行定量。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
Cyclosporin A细胞分析
免疫抑制剂以比细胞处理所需浓度高1000倍的浓度溶解在乙醇中。 将细胞（106）悬浮于微量离心管中的1mL完全培养基中; 加入1μL乙醇或环孢菌素A的乙醇溶液，并将细胞在37℃下孵育1小时。 将细胞在冰上用1mL PBS洗涤两次，并在含有50mM Tris（pH 7.5）的50μL低渗缓冲液中裂解; 0.1mM EGTA; 1 mM EDTA; 0.5mM二硫苏糖醇; 每毫升50μg苯甲基磺酰氟，50μg大豆胰蛋白酶抑制剂，5μg亮肽素和5μg抑肽酶。 将裂解物在液氮中进行三个循环的冷冻，然后在30℃下解冻，然后在4℃下以12,000×g离心10分钟。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
Animal Administration
在第0天i.p.免疫大鼠。 用0 5 mL和小鼠i.v. 用0 2mL洗涤过的绵羊红细胞（SE）的10％悬浮液。 为了引起继发性反应，在用i.v.进行初次免疫后8-11周对小鼠进行加强免疫。 注入0-2mL的0 25％洗涤的SE（107个细胞）。 对于长期治疗，动物在13周内每天在食物中平均接受45mg / kg环孢菌素A. 在杀死前5天对这些大鼠进行免疫。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
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Cyclosporin A生物活性
体外
环孢菌素A能够与T细胞中的亲环蛋白结合。 环孢菌素A通过形成亲环蛋白 - 环孢菌素A复合物来抑制神经钙蛋白。 环孢菌素A对钙调神经磷酸酶具有抑制作用，IC50为7 nM 。 环孢菌素A抑制NF-AT的核转位。 环孢菌素A通过阻止MTP打开显示对线粒体的影响，IC50为39 nM 。
体内
环孢菌素A具有免疫抑制活性，并且通过肠胃外和口服活性。 小鼠，大鼠和豚鼠的给药。 环孢菌素A可用于器官移植以防止排斥
Cyclosporin A的溶剂和溶解度
体内：
1、逐个加入每种溶剂：10％DMSO 》90％玉米油
溶解度：≥2.08mg / mL（1.73 mM）; 明确解决方案
2、逐个添加每种溶剂：10％DMSO 》40％PEG300 》5％Tween-80 》45％盐水
溶解度：2.08 mg / mL（1.73 mM）; 暂停解决方案; 需要超声波
实验参考方法
Cyclosporin A激酶测定
与纯化酶的反应混合物含有100 nM钙调神经磷酸酶，100 nM钙调蛋白和5μM32P标记的磷酸肽，在60μL（总体积）的含有20 mM Tris（pH 8），100 mM NaCl，6 mM MgCl 2,0.5的分析缓冲液中 mM二硫苏糖醇，每毫升0.1mg牛血清白蛋白，和0.1mM CaCl 2或5mM EGTA。 与细胞裂解物的反应混合物含有20μL未稀释的裂解物，5μM32P标记的磷酸肽和40μL测定缓冲液。 反应混合物含有50μM肽412或413和/或500nM冈田酸，磷酸酶1和2A的特异性抑制剂; 500nM冈田酸足以抑制Ca2 +非依赖性磷酸酶，而较高浓度也部分抑制Ca2 +依赖性磷酸酶活性。 在30℃下15分钟后，通过加入0.5mL含有5％三氯乙酸的100mM磷酸钾缓冲液（pH7.0）终止反应。 通过Dowex阳离子交换色谱法分离游离无机磷酸盐，并如所述通过闪烁计数进行定量。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
Cyclosporin A细胞分析
免疫抑制剂以比细胞处理所需浓度高1000倍的浓度溶解在乙醇中。 将细胞（106）悬浮于微量离心管中的1mL完全培养基中; 加入1μL乙醇或环孢菌素A的乙醇溶液，并将细胞在37℃下孵育1小时。 将细胞在冰上用1mL PBS洗涤两次，并在含有50mM Tris（pH 7.5）的50μL低渗缓冲液中裂解; 0.1mM EGTA; 1 mM EDTA; 0.5mM二硫苏糖醇; 每毫升50μg苯甲基磺酰氟，50μg大豆胰蛋白酶抑制剂，5μg亮肽素和5μg抑肽酶。 将裂解物在液氮中进行三个循环的冷冻，然后在30℃下解冻，然后在4℃下以12,000×g离心10分钟。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
Animal Administration
在第0天i.p.免疫大鼠。 用0 5 mL和小鼠i.v. 用0 2mL洗涤过的绵羊红细胞（SE）的10％悬浮液。 为了引起继发性反应，在用i.v.进行初次免疫后8-11周对小鼠进行加强免疫。 注入0-2mL的0 25％洗涤的SE（107个细胞）。 对于长期治疗，动物在13周内每天在食物中平均接受45mg / kg环孢菌素A. 在杀死前5天对这些大鼠进行免疫。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
