PD98059
2019-03-18 
MCE小分子
PD98059是有效，选择性和可渗透细胞的 MEK1 和 MEK2 抑制剂，IC50 分别为4 μM，50 μM。
MCE 的所有产品仅用作科学研究，我们不为任何个人用途提供产品和服务
生物活性
体外
≤20μM的PD98059浓度对培养的MCF10A，MCF10A-Neo和MCF10A-NeoT细胞没有细胞毒性。 然而，PD98059对浓度≥10μM的所有三种细胞系都是弱细胞抑制剂。 用浓度为20μM的PD98059处理MCF10A-Neo和MCF10A-NeoT培养物2-22小时不会改变总ERK含量。 然而，用PD98059治疗确实导致ERK1和ERK2的双重磷酸化形式的浓度依赖性降低。 在10-μM处理的2小时内，MCF10A-Neo和MCF10A-NeoT培养物中磷酸化的ERK含量分别降低~74％和~86％（IC50 =1μM）。 在治疗的22小时内，磷酸化的ERK形式在两种细胞系中几乎完全消除。 PD98059（PD 098059）在体外浓度（IC 50 =2-7μM）下阻止Raf或MEK激酶对MAPKK1的激活。 PD98059通过c-Raf或MEK激酶在体外抑制MAPKK1的活化和磷酸化，IC5??0值为4±2μM。 瑞士3T3细胞与PD98059（50μM）的孵育抑制了每种激动剂诱导的MAPKK活化的80-90％，但c-Raf的活化增强了2-3倍。
体内
用PD98059处理小鼠显着降低了p-ERK1 / 2的水平。 此外，与假手术小鼠相比，在酵母聚糖施用后18小时，在酵母聚糖处理的小鼠中观察到磷酸-p38表达的显着增加。 PD98059治疗显着降低p38表达。 与载体处理的CCI暴露的大鼠相比，用C9在CCI后通过von Frey试验3（18.0g±0.8，n = 10）和7天（20.21g±0.67，n = 26）测量的PD98059重复治疗减弱了机械性异常性疼痛。（15.1g±1.3，n = 7和14.21g±0.44，n = 28）。 重复注射PD98059可减少热痛觉过敏，正如冷板试验所评估的，CCI后3天（17.5秒±2.1天，n = 10天）和7天（25.54秒±1.03天，n = 26天）与载体处理的CCI-相比 暴露的大鼠（11.5 s±1.8，n = 7和11.4 s±0.88，n = 28）
实验参考方法
激酶测定
激酶反应在50μL反应体积中进行，含有50 mM Tris，pH 7.4,10 mM MgCl 2,2 mM EGTA，10μMATP（含1μCi3000Ci / mmol [γ-32P] ATP），7.6μgGST -MEK1,7.2μgGST-ERK1和20μgMBP。 在加入GST-MEK1之后但在加入GST-ERK1和ATP之前立即将PD98059和其他类黄酮加入到反应混合物中。 对照反应含有ERK1和MBP，但没有MEK。 将反应混合物在30℃温育15分钟，然后通过加入Laemmli SDS样品缓冲液终止反应。 在SDS-15％聚丙烯酰胺凝胶上分离蛋白质。 在真空干燥凝胶后，使用BioRad GS-525 Molecular Imager 通过放射自显影在X射线胶片或磷光成像上检测放射性。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
细胞分析
使用MCF10A，MCF10A-Neo和MCF10A-NeoT细胞系。用PD98059（0-100μM）处理亚汇合培养物。 通过排除台盼蓝的能力评估治疗后细胞的活力。 用于RNA分离的培养物在收获时用磷酸盐缓冲盐水（2.7mM KCl，1.5mM KH 2 PO 4,137mM NaCl，8mM Na 2 HPO 4，pH 7.2）洗涤两次并在-80℃下储存。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
Animal Administration
小鼠
将雄性CD小鼠（20-22g）随机分配到以下组中：1。酵母聚糖+ DMSO组。 用酵母聚糖（500mg / kg，悬浮在盐水溶液中）腹膜内（i.p.）处理小鼠，并用载体进行PD98059（10％DMSO，v / v），腹膜内注射。 在酵母聚糖给药后1和6小时（N = 10）。 2. PD98059组。 与酵母聚糖+ DMSO组相同，但在酵母聚糖（N = 10）后1小时和6小时代替DMSO给予PD98059（10mg / kg，腹膜内推注）。 3. Sham + DMSO组。 与酵母聚糖+ DMSO组相同但是用盐水溶液代替酵母聚糖（N = 10）。 4. Sham + PD98059组。 与Sham + DMSO组相同，除了在给予盐水后1小时和6小时施用PD98059（10mg / kg i.p.推注）（N = 10）。
大鼠
使用大鼠（雄性Wistar，300-350g）。 PD98059（2.5μg/5μL，i.t。）单次或在CCI前16小时和1小时预先给药，然后每天一次，持续7天。 载体处理的暴露于CCI的大鼠根据相同的时间表接受75％DMSO。 未处理的和V（DMSO）处理的CCI暴露的大鼠之间的疼痛行为没有显着差异。 在整个研究中使用这种PD98059方法或赋形剂给药，并在文中称为“重复给药”。 在PD98059给药后30分钟CCI后第7天，使用von Frey试验测量触觉异常性疼痛，并使用冷板试验进行热痛觉过敏。 另外，在CCI后第7天，载体处理的和PD98059处理的大鼠接受单次i.t. 在PD98059后30分钟注射载体，吗啡（2.5μg/5μL）或丁丙诺啡（2.5μg/5μL），然后30分钟后重复von Frey和/或冷板试验。 由于在幼稚大鼠中吗啡2.5μg/5μL的剂量在甩尾试验中产生最大的镇痛作用。 较低剂量的吗啡用于共同给药实验，因此观察阿片类药物有效性的可能增强。 载体处理的和PD98059处理的幼稚大鼠（未受伤的大鼠）接受单次i.t. 在PD98059后30分钟注射载体，吗啡（0.5μg/5μL）或丁丙诺啡（2.5μg/5μL），然后30分钟后进行甩尾试验。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
MCE 的所有产品仅用作科学研究，我们不为任何个人用途提供产品和服务
生物活性
体外
≤20μM的PD98059浓度对培养的MCF10A，MCF10A-Neo和MCF10A-NeoT细胞没有细胞毒性。 然而，PD98059对浓度≥10μM的所有三种细胞系都是弱细胞抑制剂。 用浓度为20μM的PD98059处理MCF10A-Neo和MCF10A-NeoT培养物2-22小时不会改变总ERK含量。 然而，用PD98059治疗确实导致ERK1和ERK2的双重磷酸化形式的浓度依赖性降低。 在10-μM处理的2小时内，MCF10A-Neo和MCF10A-NeoT培养物中磷酸化的ERK含量分别降低~74％和~86％（IC50 =1μM）。 在治疗的22小时内，磷酸化的ERK形式在两种细胞系中几乎完全消除。 PD98059（PD 098059）在体外浓度（IC 50 =2-7μM）下阻止Raf或MEK激酶对MAPKK1的激活。 PD98059通过c-Raf或MEK激酶在体外抑制MAPKK1的活化和磷酸化，IC5??0值为4±2μM。 瑞士3T3细胞与PD98059（50μM）的孵育抑制了每种激动剂诱导的MAPKK活化的80-90％，但c-Raf的活化增强了2-3倍。
体内
用PD98059处理小鼠显着降低了p-ERK1 / 2的水平。 此外，与假手术小鼠相比，在酵母聚糖施用后18小时，在酵母聚糖处理的小鼠中观察到磷酸-p38表达的显着增加。 PD98059治疗显着降低p38表达。 与载体处理的CCI暴露的大鼠相比，用C9在CCI后通过von Frey试验3（18.0g±0.8，n = 10）和7天（20.21g±0.67，n = 26）测量的PD98059重复治疗减弱了机械性异常性疼痛。（15.1g±1.3，n = 7和14.21g±0.44，n = 28）。 重复注射PD98059可减少热痛觉过敏，正如冷板试验所评估的，CCI后3天（17.5秒±2.1天，n = 10天）和7天（25.54秒±1.03天，n = 26天）与载体处理的CCI-相比 暴露的大鼠（11.5 s±1.8，n = 7和11.4 s±0.88，n = 28）
实验参考方法
激酶测定
激酶反应在50μL反应体积中进行，含有50 mM Tris，pH 7.4,10 mM MgCl 2,2 mM EGTA，10μMATP（含1μCi3000Ci / mmol [γ-32P] ATP），7.6μgGST -MEK1,7.2μgGST-ERK1和20μgMBP。 在加入GST-MEK1之后但在加入GST-ERK1和ATP之前立即将PD98059和其他类黄酮加入到反应混合物中。 对照反应含有ERK1和MBP，但没有MEK。 将反应混合物在30℃温育15分钟，然后通过加入Laemmli SDS样品缓冲液终止反应。 在SDS-15％聚丙烯酰胺凝胶上分离蛋白质。 在真空干燥凝胶后，使用BioRad GS-525 Molecular Imager 通过放射自显影在X射线胶片或磷光成像上检测放射性。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
细胞分析
使用MCF10A，MCF10A-Neo和MCF10A-NeoT细胞系。用PD98059（0-100μM）处理亚汇合培养物。 通过排除台盼蓝的能力评估治疗后细胞的活力。 用于RNA分离的培养物在收获时用磷酸盐缓冲盐水（2.7mM KCl，1.5mM KH 2 PO 4,137mM NaCl，8mM Na 2 HPO 4，pH 7.2）洗涤两次并在-80℃下储存。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
Animal Administration
小鼠
将雄性CD小鼠（20-22g）随机分配到以下组中：1。酵母聚糖+ DMSO组。 用酵母聚糖（500mg / kg，悬浮在盐水溶液中）腹膜内（i.p.）处理小鼠，并用载体进行PD98059（10％DMSO，v / v），腹膜内注射。 在酵母聚糖给药后1和6小时（N = 10）。 2. PD98059组。 与酵母聚糖+ DMSO组相同，但在酵母聚糖（N = 10）后1小时和6小时代替DMSO给予PD98059（10mg / kg，腹膜内推注）。 3. Sham + DMSO组。 与酵母聚糖+ DMSO组相同但是用盐水溶液代替酵母聚糖（N = 10）。 4. Sham + PD98059组。 与Sham + DMSO组相同，除了在给予盐水后1小时和6小时施用PD98059（10mg / kg i.p.推注）（N = 10）。
大鼠
使用大鼠（雄性Wistar，300-350g）。 PD98059（2.5μg/5μL，i.t。）单次或在CCI前16小时和1小时预先给药，然后每天一次，持续7天。 载体处理的暴露于CCI的大鼠根据相同的时间表接受75％DMSO。 未处理的和V（DMSO）处理的CCI暴露的大鼠之间的疼痛行为没有显着差异。 在整个研究中使用这种PD98059方法或赋形剂给药，并在文中称为“重复给药”。 在PD98059给药后30分钟CCI后第7天，使用von Frey试验测量触觉异常性疼痛，并使用冷板试验进行热痛觉过敏。 另外，在CCI后第7天，载体处理的和PD98059处理的大鼠接受单次i.t. 在PD98059后30分钟注射载体，吗啡（2.5μg/5μL）或丁丙诺啡（2.5μg/5μL），然后30分钟后重复von Frey和/或冷板试验。 由于在幼稚大鼠中吗啡2.5μg/5μL的剂量在甩尾试验中产生最大的镇痛作用。 较低剂量的吗啡用于共同给药实验，因此观察阿片类药物有效性的可能增强。 载体处理的和PD98059处理的幼稚大鼠（未受伤的大鼠）接受单次i.t. 在PD98059后30分钟注射载体，吗啡（0.5μg/5μL）或丁丙诺啡（2.5μg/5μL），然后30分钟后进行甩尾试验。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
