CHIR-99021分子量
2019-03-14 
MCE小分子
CHIR-99021是 GSK-3α/β 抑制剂， IC50 分别为 10 nM，6.7 nM。 抑制 GSK-3α/β 比同源物 CDC2 和 ERK2 高 500 倍。
MCE 的所有产品仅用作科学研究，我们不为任何个人用途提供产品和服务
CHIR-99021分子量：465.34
CHIR-99021生物活性
体外
CHIR 99021抑制人GSK-3β，Ki值为9.8 nM。 CHIR 99021是一种小有机分子，通过竞争其ATP结合位点来抑制GSK3α和GSK3β。体外激酶检测显示CHIR 99021特异性抑制GSK3β（IC50 = ~5 nM）和GSK3α（IC50 = ~10 nM）， 对其他激酶的影响很小。 在CHIR-99021存在下，ES-D3细胞的存活率在2.5μM时降低24.7％，在5μM时降低56.3％，在7.5μM时降低61.9％，在10μMCHIR-99021时降低69.2％，IC50为4.9μM 。
体内
在ZDF大鼠中，单次口服剂量的CHIR 99021（16mg / kg或48mg / kg）迅速降低血浆葡萄糖，给药后3-4小时最大降低近150mg / dl。 在照射前4小时给予CHIR99021（2mg / kg）一次，在14.5Gy腹部照射（ABI）后显着提高存活率。 CHIR99021处理显着阻断了隐窝细胞凋亡和p-H2AX +细胞的积累，并改善了隐窝再生和绒毛高度。 CHIR99021治疗通过阻断细胞凋亡来增加Lgr5 +细胞存活率，并且有效地防止Olfm4，Lgr5和CD44的减少早在4小时。
CHIR-99021实验参考方法
激酶测定
通过使用其His或Glu标签从SF9细胞中纯化激酶。 纯化Glu标记的蛋白质，纯化His标记的蛋白质。 激酶测定在96孔板中用适当的肽底物在300μL反应缓冲液中进行（50mM Tris-HCl，pH 7.5,10mM MgCl 2,1mM EGTA，1mM二硫苏糖醇，25mMβ-甘油磷酸盐，1mM的变化） NaF和0.01％牛血清白蛋白）。 肽的Km值为1至100μM。 将CHIR 99021或CHIR GSKIA加入3.5μLMe2SO中，然后加入ATP至终浓度为1μM。 温育后，将三份100μL等分试样转移至含有100μL/孔50μMATP和20mM EDTA的Combiplate 8平板。 1小时后，用磷酸盐缓冲盐水冲洗孔5次，填充200μL闪烁液，密封，30分钟后在闪烁计数器中计数。 所有步骤均为室温。 抑制百分比计算为100×（抑制剂 - 无酶对照）/（Me2SO对照 - 无酶对照）。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
细胞分析
使用MTT测定法在暴露于不同浓度的GSK3抑制剂三天后测定小鼠ES细胞的存活力。 MTT活性的降低是一种可靠的基于代谢的测试，用于量化细胞活力; 这种减少与细胞活力的丧失相关。 将2,000个细胞在含有LIF的ES细胞培养基中的明胶包被的96孔板上接种过夜。 第二天，将培养基更换为不含LIF且血清浓度降低的培养基，并补充0.1-1μMBIO，或1-10μMSB-216763，CHIR-99021或CHIR-98014。 不含GSK3抑制剂或DMSO的基础培养基用作对照。 所有测试条件一式三份进行分析
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
Animal Administration
大鼠
制备重量<140g的雄性Sprague Dawley大鼠的原代肝细胞，并在分离后1-3小时使用。 将等份的1×10 6个细胞在1mL DMEM / F12培养基加0.2％BSA和CHIR 99021（口服16或48mg / kg）或对照中在12孔板中在低速振荡器上于37℃孵育30分钟。 在富含CO 2的气氛中，通过离心收集并在缓冲液A加0.01％NP40中冷冻/解冻裂解; 再次进行GS测定。
小鼠
使用6-10周龄的小鼠。 对C57BL / 6背景（F10）和Lgr5-EGFP（Lgr5-EGFP-IRES-creERT2）小鼠的PUMA + / +和PUMA - / - 同窝小鼠进行全身照射（TBI）或腹部照射（ABI）。 在放射前4小时腹膜内（i.p.）注射小鼠2mg / kg CHIR99021或在辐射前28小时和1小时/ 1小时SB415286注射小鼠。 处死小鼠以收集小肠用于组织学分析和蛋白质印迹。 所有小鼠均腹膜内注射。 在处死前用100mg / kg BrdU。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考
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CHIR-99021分子量：465.34
CHIR-99021生物活性
体外
CHIR 99021抑制人GSK-3β，Ki值为9.8 nM。 CHIR 99021是一种小有机分子，通过竞争其ATP结合位点来抑制GSK3α和GSK3β。体外激酶检测显示CHIR 99021特异性抑制GSK3β（IC50 = ~5 nM）和GSK3α（IC50 = ~10 nM）， 对其他激酶的影响很小。 在CHIR-99021存在下，ES-D3细胞的存活率在2.5μM时降低24.7％，在5μM时降低56.3％，在7.5μM时降低61.9％，在10μMCHIR-99021时降低69.2％，IC50为4.9μM 。
体内
在ZDF大鼠中，单次口服剂量的CHIR 99021（16mg / kg或48mg / kg）迅速降低血浆葡萄糖，给药后3-4小时最大降低近150mg / dl。 在照射前4小时给予CHIR99021（2mg / kg）一次，在14.5Gy腹部照射（ABI）后显着提高存活率。 CHIR99021处理显着阻断了隐窝细胞凋亡和p-H2AX +细胞的积累，并改善了隐窝再生和绒毛高度。 CHIR99021治疗通过阻断细胞凋亡来增加Lgr5 +细胞存活率，并且有效地防止Olfm4，Lgr5和CD44的减少早在4小时。
CHIR-99021实验参考方法
激酶测定
通过使用其His或Glu标签从SF9细胞中纯化激酶。 纯化Glu标记的蛋白质，纯化His标记的蛋白质。 激酶测定在96孔板中用适当的肽底物在300μL反应缓冲液中进行（50mM Tris-HCl，pH 7.5,10mM MgCl 2,1mM EGTA，1mM二硫苏糖醇，25mMβ-甘油磷酸盐，1mM的变化） NaF和0.01％牛血清白蛋白）。 肽的Km值为1至100μM。 将CHIR 99021或CHIR GSKIA加入3.5μLMe2SO中，然后加入ATP至终浓度为1μM。 温育后，将三份100μL等分试样转移至含有100μL/孔50μMATP和20mM EDTA的Combiplate 8平板。 1小时后，用磷酸盐缓冲盐水冲洗孔5次，填充200μL闪烁液，密封，30分钟后在闪烁计数器中计数。 所有步骤均为室温。 抑制百分比计算为100×（抑制剂 - 无酶对照）/（Me2SO对照 - 无酶对照）。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
细胞分析
使用MTT测定法在暴露于不同浓度的GSK3抑制剂三天后测定小鼠ES细胞的存活力。 MTT活性的降低是一种可靠的基于代谢的测试，用于量化细胞活力; 这种减少与细胞活力的丧失相关。 将2,000个细胞在含有LIF的ES细胞培养基中的明胶包被的96孔板上接种过夜。 第二天，将培养基更换为不含LIF且血清浓度降低的培养基，并补充0.1-1μMBIO，或1-10μMSB-216763，CHIR-99021或CHIR-98014。 不含GSK3抑制剂或DMSO的基础培养基用作对照。 所有测试条件一式三份进行分析
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
Animal Administration
大鼠
制备重量<140g的雄性Sprague Dawley大鼠的原代肝细胞，并在分离后1-3小时使用。 将等份的1×10 6个细胞在1mL DMEM / F12培养基加0.2％BSA和CHIR 99021（口服16或48mg / kg）或对照中在12孔板中在低速振荡器上于37℃孵育30分钟。 在富含CO 2的气氛中，通过离心收集并在缓冲液A加0.01％NP40中冷冻/解冻裂解; 再次进行GS测定。
小鼠
使用6-10周龄的小鼠。 对C57BL / 6背景（F10）和Lgr5-EGFP（Lgr5-EGFP-IRES-creERT2）小鼠的PUMA + / +和PUMA - / - 同窝小鼠进行全身照射（TBI）或腹部照射（ABI）。 在放射前4小时腹膜内（i.p.）注射小鼠2mg / kg CHIR99021或在辐射前28小时和1小时/ 1小时SB415286注射小鼠。 处死小鼠以收集小肠用于组织学分析和蛋白质印迹。 所有小鼠均腹膜内注射。 在处死前用100mg / kg BrdU。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考
