SAR131675是VEGFR3抑制剂

    SAR131675是有效，选择性的 VEGFR3 抑制剂，IC50 值为23 nM。

 

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    SAR131675的生物活性

 

    体外

 

    AR131675对VEGFR-3具有高选择性，对107种受体，酶，离子通道和65种激酶具有选择性。然而，它对VEGFR-2具有中度活性，VEGFR-3 / VEGFR-2比率约为10.SAR131675抑制HEFR细胞中VEGFR-3酪氨酸激酶活性和VEGFR-3自身磷酸化，IC 50值为20和45 nM，分别。SAR131675剂量依赖性地抑制由VEGFR-3配体VEGFC和VEGFD诱导的原代人淋巴细胞的增殖，IC 50为约20nM。SSAR131675对一组30个肿瘤和原代细胞没有抗增殖活性，进一步显示其高特异性，表明SAR131675不是细胞毒性或细胞抑制剂。

 

    在体内

 

    SAR131675在小鼠中具有非常好的耐受性，并且在几种原位和同系模型中显示出有效的抗肿瘤作用，包括乳腺4T1癌和RIP1Tag2肿瘤。有趣的是，它显着减少淋巴结侵袭和肺转移，显示其体内抗淋巴管生成活性。SAR131675显着降低4T1肿瘤中的TAM浸润和聚集。

 

    实验参考方法

 

    激酶测定

 

    多孔板预涂有合成聚合物基质poly-Glu-Tyr（polyGT 4：1）。该反应是在激酶缓冲液的存在下进行（10×：50mM Hepes缓冲液，pH 7.4中，20毫摩尔MgCl 2，0.1mM的的MnCl 2，和0.2mM的Na 3 VO 4），补充了ATP和二甲亚砜（DMSO）阳性对照（C +）或SAR131675（范围为3-1,000 nM）。对于VEGFR-1和VEGFR-3，ATP使用30μM，对于VEGFR-2，ATP使用15μM。用与辣根过氧化物酶偶联的磷酸酪氨酸特异性单克隆抗体（mAb）探测磷酸化的poly-GT，并在黑暗中用HRP显色底物（OPD）显色。然后通过加入100μL1.25mol/ LH 2 SO 4终止反应，使用Envision分光光度计在492nm处测定吸光度。

 

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

 

    细胞分析

 

    将HLMVEC接种在涂有0.3％明胶（每孔5000个细胞）的96孔板中。在不存在或存在SAR131675的情况下，将细胞在RPMI 0.1％FCS中与VEGFA（10ng / mL）VEGFC（300ng / mL），VEGFD（300ng / mL）或FGF2（10ng / mL）一起温育。五天后，用细胞Titer-glo发光细胞活力测定法定量活细胞。

 

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

 

    Animal Administration

 

    小鼠：将用200μgFGF2或PBS浸渍的无菌海绵盘皮下引入麻醉小鼠的背部。前2天将FGF2重新注入海绵中。在海绵植入当天开始每日口服SAR131675（30,100和300mg / kg / d）。七天后，将动物安乐死并取出海绵，收获并在4℃下在RIPA缓冲液中裂解。在6,000×g离心后，收集上清液用于进一步分析。

 

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。