WAY 316606
2019-03-14 
MCE小分子
WAY 316606 是一种分泌蛋白 sFRP-1 抑制剂，是分泌性醣蛋白 Wnt 的拮抗剂，在 FP 结合检测使用中，WAY-316606 作用于 sFRP-1，IC50 为 0.5 μM。
MCE 的所有产品仅用作科学研究，我们不为任何个人用途提供产品和服务
WAY 316606的生物活性
体外
WAY-316606对U2-OS细胞Wnt-荧光素酶活性的EC50为0.65μM[1]。 WAY-316606与分泌的卷曲相关蛋白（sFRP）-1抑制剂结合，KD为0.08μM，抑制sFRP-1，EC50为0.65μM。 WAY-316606也与sFRP-2结合，虽然KD为1μM时弱10倍。 使用荧光偏振结合分析，其采用竞争结合形式的荧光探针化合物和纯化的人sFRP-1蛋白，WAY-316606的IC50为0.5μM[2]。
体内
当在新生儿鼠颅骨测定中测试时，WAY-316606增加骨形成。 WAY-316606以剂量依赖性方式将总骨面积增加至60％，EC50为约1nM。 WAY-316606具有良好的水溶性，中度至低度抑制细胞色素p450同工酶（3A4,2D6,2C9），并且在大鼠和人肝微粒体中具有良好的稳定性（每个物种中t1 / 2> 60分钟）。 在雌性Sprague-Dawley大鼠中，WAY-316606在单次静脉推注剂量（2 mg / kg）后表现出高血浆清除率（77 mL / min / kg，大于肝血流量），导致药物暴露迅速下降 尽管有给药途径，但仍在血浆中
WAY 316606的实验参考方法
激酶测定[2]
通过光谱法测定WAY-316606与纯化的sFRP的结合。 将sFRP-1或-2储备溶液在缓冲溶液中稀释至1μM并测量初始荧光。 将增加浓度的WAY-316606（0至50μM）加入到比色皿中的蛋白质中并孵育5分钟，然后使用Fluoromax-2荧光计评估荧光强度。 在对照实验中，使用DMSO（载体对照）匹配的缓冲溶液。 以比率模式（S / R，信号/参考）扫描荧光光谱，以补偿作为波长函数的灯输出的变化。 将荧光变化拟合为二次方程以获得表观解离常数[2]。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
细胞分析[1]
U2OS骨细胞感染重组腺病毒5（Ad5）-WNT3，感染复数（MOI）为2，然后用Ad5-sFRP-1和Ad5-16xTCF-荧光素酶感染，每个MOI为10小时.4小时 感染后，将细胞在无菌低温小瓶中以9×10 6个细胞/ mL的细胞密度冷冻，并储存在-150℃的冰箱中。 对于该测定，将一小瓶冷冻细胞解冻，并将细胞重悬于平板培养基[含有5％胎牛血清，2mM GlutaMAX-1和1％（v / v）青霉素的无酚红RPMI 1640培养基中。 - 链霉素]至最终细胞密度为1.5×10 5个细胞/ mL。 然后将重悬的细胞以100μL细胞悬浮液/孔（即1.5×10 4个细胞/孔）的体积接种在96孔组织培养物处理的板中。 将板在37℃下在5％CO 2/95％湿润空气培养箱内孵育5小时或直至细胞附着并开始扩散。 在添加WAY-316606之前，用50μL/孔的含有10％胎牛血清，2mM GlutaMAX-1和1％（v / v）青霉素 - 链霉素的不含酚红的RPMI 1640替换培养基。 然后将含有2mM GlutaMAX-1和1％（v / v）青霉素 - 链霉素的无酚红RPMI 1640稀释的WAY-316606或载体（通常为DMSO）以4孔/稀释液的重复样品加入孔中 将板在37℃下孵育过夜。 用化合物以2倍连续稀释度从10000-4.9nM进行剂量 - 反应实验。 过夜温育后，用150uL /孔不含钙或镁的PBS洗涤细胞两次，并在室温下在摇床上用50μL/孔的1×细胞培养裂解试剂裂解30分钟。 将等份的细胞裂解物（30μL）转移至96孔发光计板，并使用100μL/孔的荧光素酶底物在MicroLumat PLUS发光计中测量荧光素酶活性。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
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WAY 316606的生物活性
体外
WAY-316606对U2-OS细胞Wnt-荧光素酶活性的EC50为0.65μM[1]。 WAY-316606与分泌的卷曲相关蛋白（sFRP）-1抑制剂结合，KD为0.08μM，抑制sFRP-1，EC50为0.65μM。 WAY-316606也与sFRP-2结合，虽然KD为1μM时弱10倍。 使用荧光偏振结合分析，其采用竞争结合形式的荧光探针化合物和纯化的人sFRP-1蛋白，WAY-316606的IC50为0.5μM[2]。
体内
当在新生儿鼠颅骨测定中测试时，WAY-316606增加骨形成。 WAY-316606以剂量依赖性方式将总骨面积增加至60％，EC50为约1nM。 WAY-316606具有良好的水溶性，中度至低度抑制细胞色素p450同工酶（3A4,2D6,2C9），并且在大鼠和人肝微粒体中具有良好的稳定性（每个物种中t1 / 2> 60分钟）。 在雌性Sprague-Dawley大鼠中，WAY-316606在单次静脉推注剂量（2 mg / kg）后表现出高血浆清除率（77 mL / min / kg，大于肝血流量），导致药物暴露迅速下降 尽管有给药途径，但仍在血浆中
WAY 316606的实验参考方法
激酶测定[2]
通过光谱法测定WAY-316606与纯化的sFRP的结合。 将sFRP-1或-2储备溶液在缓冲溶液中稀释至1μM并测量初始荧光。 将增加浓度的WAY-316606（0至50μM）加入到比色皿中的蛋白质中并孵育5分钟，然后使用Fluoromax-2荧光计评估荧光强度。 在对照实验中，使用DMSO（载体对照）匹配的缓冲溶液。 以比率模式（S / R，信号/参考）扫描荧光光谱，以补偿作为波长函数的灯输出的变化。 将荧光变化拟合为二次方程以获得表观解离常数[2]。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
细胞分析[1]
U2OS骨细胞感染重组腺病毒5（Ad5）-WNT3，感染复数（MOI）为2，然后用Ad5-sFRP-1和Ad5-16xTCF-荧光素酶感染，每个MOI为10小时.4小时 感染后，将细胞在无菌低温小瓶中以9×10 6个细胞/ mL的细胞密度冷冻，并储存在-150℃的冰箱中。 对于该测定，将一小瓶冷冻细胞解冻，并将细胞重悬于平板培养基[含有5％胎牛血清，2mM GlutaMAX-1和1％（v / v）青霉素的无酚红RPMI 1640培养基中。 - 链霉素]至最终细胞密度为1.5×10 5个细胞/ mL。 然后将重悬的细胞以100μL细胞悬浮液/孔（即1.5×10 4个细胞/孔）的体积接种在96孔组织培养物处理的板中。 将板在37℃下在5％CO 2/95％湿润空气培养箱内孵育5小时或直至细胞附着并开始扩散。 在添加WAY-316606之前，用50μL/孔的含有10％胎牛血清，2mM GlutaMAX-1和1％（v / v）青霉素 - 链霉素的不含酚红的RPMI 1640替换培养基。 然后将含有2mM GlutaMAX-1和1％（v / v）青霉素 - 链霉素的无酚红RPMI 1640稀释的WAY-316606或载体（通常为DMSO）以4孔/稀释液的重复样品加入孔中 将板在37℃下孵育过夜。 用化合物以2倍连续稀释度从10000-4.9nM进行剂量 - 反应实验。 过夜温育后，用150uL /孔不含钙或镁的PBS洗涤细胞两次，并在室温下在摇床上用50μL/孔的1×细胞培养裂解试剂裂解30分钟。 将等份的细胞裂解物（30μL）转移至96孔发光计板，并使用100μL/孔的荧光素酶底物在MicroLumat PLUS发光计中测量荧光素酶活性。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
