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Brefeldin A布雷非德菌素 A

  Brefeldin A 布雷非德菌素 A (BFA) 是一种内酯抗生素,是蛋白质运输的特定抑制剂。Brefeldin A 布雷非德菌素 A 阻断分泌蛋白和膜蛋白从内质网向高尔基体的转运。Brefeldin A 布雷非德菌素 A 也是一种自噬 (autophagy) 和 mitophagy 抑制剂。Brefeldin A 布雷非德菌素 A 可抑制 HSV-1病毒,并具有抗癌活性。
 
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  生物活性
 
  体外研究
 
  Brefeldin A 布雷非德菌素 A (BFA) 处理 15 小时或 40 小时,会导致内质网 (ER) 显著肿胀,并将其定位转移到正常大鼠肾 (NRK) 细胞的外围。延长 Brefeldin A 布雷非德菌素 A 处理会导致 MT 和肌动蛋白细胞骨架显著破坏[1]。BARS 的 ADP-核糖基化是由 Brefeldin A 布雷非德菌素 A 和 ADPR 之间形成结合物介导的。当与来自 BFA 处理的 CD38+ HeLa 细胞[3]的培养基一起孵育时,BARS 显示 BAC 结合。Brefeldin A 布雷非德菌素 A 在 MDA-MB-231 乳腺癌细胞中诱导不依赖锚定的细胞死亡,抑制 3D 和 2D 培养物中 MDA-MB-231 集落的形成,并抑制 MDA-MB 的迁移和 MMP 9 (基质金属肽酶 9) 活性-231[2]。
 
  MCE 未独立验证这些方法的准确性,仅供参考。
 
  溶解性数据
 
  动物实验:
 
  请根据您的 实验动物和给药方式 选择适当的溶解方案。
 
  以下溶解方案都请先按照 In Vitro 方式配制澄清的储备液,再依次添加助溶剂:
 
  ——为保证实验结果的可靠性,澄清的储备液可以根据储存条件,适当保存;体内实验的工作液,建议您现用现配,当天使用;
 
  以下溶剂前显示的百分比是指该溶剂在您配制终溶液中的体积占比;如在配制过程中出现沉淀、析出现象,可以通过加热和/或超声的方式助溶
 
  方案 一
 
  请依序添加每种溶剂: 10% DMSO  →  40% PEG300  →  5% Tween-80  →  45% Saline
 
  Solubility: ≥ 2.5 mg/mL (8.92 mM); 澄清溶液
 
  此方案可获得 ≥ 2.5 mg/mL(饱和度未知)的澄清溶液。
 
  以 1 mL 工作液为例,取 100 μL 25.0 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀;再向上述体系中加入 50 μL Tween-80,混合均匀;然后再继续加入 450 μL 生理盐水 定容至 1 mL。
 
  生理盐水的配制:将 0.9 g 氯化钠,溶解于 ddH₂O 并定容至 100 mL,可以得到澄清透明的生理盐水溶液。
 
  方案 二
 
  请依序添加每种溶剂: 10% DMSO  →  90% (20% SBE-β-CD in Saline)
 
  Solubility: ≥ 2.5 mg/mL (8.92 mM); 澄清溶液
 
  此方案可获得 ≥ 2.5 mg/mL(饱和度未知)的澄清溶液。
 
  以 1 mL 工作液为例,取 100 μL 25.0 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 900 μL 20% 的 SBE-β-CD 生理盐水水溶液 中,混合均匀。
 
  2 g SBE-β-CD(磺丁基醚 β-环糊精)粉末定容于 10 mL 的生理盐水中,完全溶解至澄清透明。
 
  方案 三
 
  请依序添加每种溶剂: 10% DMSO  →  90% Corn Oil
 
  Solubility: ≥ 2.5 mg/mL (8.92 mM); 澄清溶液
 
  此方案可获得 ≥ 2.5 mg/mL(饱和度未知)的澄清溶液,此方案实验周期在半个月以上的动物实验酌情使用。
 
  以 1 mL 工作液为例,取 100 μL 25.0 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 900 μL玉米油中,混合均匀。
 
  方案 四
 
  请依序添加每种溶剂: 10% EtOH  →  40% PEG300  →  5% Tween-80  →  45% Saline
 
  Solubility: ≥ 2.5 mg/mL (8.92 mM); 澄清溶液
 
  此方案可获得 ≥ 2.5 mg/mL(饱和度未知)的澄清溶液。
 
  以 1 mL 工作液为例,取 100 μL 25.0 mg/mL 的澄清 EtOH 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀;再向上述体系中加入 50 μL Tween-80,混合均匀;然后再继续加入 450 μL 生理盐水 定容至 1 mL。
 
  生理盐水的配制:将 0.9 g 氯化钠,溶解于 ddH₂O 并定容至 100 mL,可以得到澄清透明的生理盐水溶液。
 
  方案 五
 
  请依序添加每种溶剂: 10% EtOH  →  90% (20% SBE-β-CD in Saline)
 
  Solubility: ≥ 2.5 mg/mL (8.92 mM); 澄清溶液
 
  此方案可获得 ≥ 2.5 mg/mL(饱和度未知)的澄清溶液。
 
  以 1 mL 工作液为例,取 100 μL 25.0 mg/mL 的澄清 EtOH 储备液加到 900 μL 20% 的 SBE-β-CD 生理盐水水溶液 中,混合均匀。
 
  2 g SBE-β-CD(磺丁基醚 β-环糊精)粉末定容于 10 mL 的生理盐水中,完全溶解至澄清透明。
 
  方案 六
 
  请依序添加每种溶剂: 10% EtOH  →  90% Corn Oil
 
  Solubility: ≥ 2.5 mg/mL (8.92 mM); 澄清溶液
 
  此方案可获得 ≥ 2.5 mg/mL(饱和度未知)的澄清溶液,此方案实验周期在半个月以上的动物实验酌情使用。
 
  以 1 mL 工作液为例,取 100 μL 25.0 mg/mL 的澄清 EtOH 储备液加到 900 μL 玉米油中,混合均匀。
 
  实验参考方法
 
  细胞实验[1]
 
  将细胞接种于盖玻片上,用含 3% 多聚甲醛的 PBS 固定(室温 10 分钟),随后用 PBS 洗涤。
 
  用含 0.01% Triton X-100 的 PBS 在室温下对细胞进行透化处理,时长 7 分钟。
 
  洗涤盖玻片(PBS/0.2% Tween 洗涤 3 次),先后用 PBS/0.4% 鱼皮明胶 / 0.2% Tween 孵育 5 分钟、PBS/2.5% 山羊血清 / 0.2% Tween 孵育 5 分钟进行封闭。
 
  封闭完成后,加入一抗,37℃孵育 45 分钟,随后用 PBS/0.2% Tween 洗涤 5 次,每次 5 分钟。
 
  加入二抗,37℃孵育 30 分钟,之后按上述相同方法洗涤细胞。
 
  将盖玻片以 9:1 的甘油 / PBS 混合液(含 0.1% 邻苯二胺)作为封片剂封片。
 
  MCE 未对这些方法的准确性进行独立验证,仅供参考

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