Centrinone是可逆的PLK4抑制剂

　　Centrinone (LCR-263) 是选择性，可逆的 PLK4 抑制剂，Ki 值为 0.16 nM。

 

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　　生物活性

 

　　体外研究

 

　　Centrinone (LCR-263) 对 Plk4 的选择性是 Aurora A/B 的 1000 多倍，并且在耗尽中心体的浓度下不影响细胞 Aurora A 或 B 底物磷酸化。用 Centrinone (LCR-263) 处理 HeLa 人宫颈癌细胞会导致在每一轮细胞分裂中含有中心粒和中心粒周围物质标记的病灶逐渐减少，直到大多数细胞缺乏中心粒和中心体。用 Centrinone (LCR-263) 处理可减少多纤毛 Xenopus 上皮细胞中的中心粒数量，这表明 Plk4 还控制分化细胞中的中心粒扩增。Centrinone (LCR-263) 处理会导致人类和其他脊椎动物细胞的中心体耗竭。中心体丢失通过 p53 依赖性机制不可逆地阻止正常细胞处于衰老样 G1 状态，该机制独立于 DNA 损伤、压力、Hippo 信号、延长有丝分裂持续时间或分离错误[1]。

 

　　实验参考方法

 

　　激酶测定

 

　　纯化的6xHis标签人类Plk4激酶结构域溶于20 mM Tris pH 7.5、100 mM NaCl、10%甘油和1 mM DTT中。2X反应缓冲液由50 mM HEPES pH 8.5、20 mM MgCl2、1 mM DTT、0.2 mg/mL BSA、16 μM ATP和200 μM A-A11底物组成。最终反应中的Plk4浓度为2.5-10 nM，最终pH为8.0。以剂量依赖方式添加抑制剂（Centrinone），使用DMSO储备液。反应在25°C下进行4-16小时。检测使用ADP-Glo试剂，发光值在酶标仪上测量。

 

　　MCE尚未独立确认这些方法的准确性，仅供参考。

 

　　细胞测定

 

　　对于每个条件，细胞以三重复的方式接种到6孔板中，每孔50,000个细胞。向HeLa细胞中添加125 nM Centrinone（LCR-263），或向NIH/3T3细胞中添加300 nM。每24小时收集3个孔的样本进行分析。使用TC10自动细胞计数器进行细胞计数。

 

　　参考文献

 

　　[1]. Wong YL. et al. Cell biology. Reversible centriole depletion with an inhibitor of Polo-like kinase 4. Science. 2015 Jun 5;348(6239):1155-60.