克唑替尼Crizotinib抑制剂

　　Crizotinib (PF-02341066) 是一种具有口服活性的，ATP 竞争性的 ALK 和 c-Met 抑制剂，IC50 分别为 20 和 8 nM。在细胞的实验中，Crizotinib 抑制 NPM-ALK 的酪氨酸磷酸化和 c-Met 的酪氨酸磷酸化，IC50 分别为 24 和 11 nM。Crizotinib 也是 ROS1 抑制剂。Crizotinib 具有有效的肿瘤生长抑制作用。

 

　　MCE 的所有产品仅用作科学研究或药证申报，我们不为任何个人用途提供产品和服务

 

　　我们将采用定制合成服务的方式为您快速提供所需产品和技术服务

 

　　生物活性

 

　　体外研究

 

　　Crizotinib克唑替尼 (PF-02341066) 在小鼠 mIMCD3 或犬 MDCK 上皮细胞中对 c-Met 磷酸化显示出相似的效力，IC50 分别为 5 nM 和 20 nM。PF-2341066 对 NIH3T3 细胞中表达 c-Met ATP 结合位点突变体 V1092I 或 H1094R 以及 P-loop 突变体 M1250T 显示出改善或相似的活性，IC50 分别为 19 nM、2 nM 和 15 nM，相较于表达野生型受体的 NIH3T3 细胞 IC50 为 13 nM。相比之下，在表达 c-Met 激活环突变体 Y1230C 和 Y1235D 的细胞中观察到 PF-2341066 的效力显著下降，IC50 分别为 127 nM 和 92 nM。PF-2341066 也有效地抑制 NCI-H69 和 HOP92 细胞中 c-Met 的磷酸化，IC50 分别为 13 nM 和 16 nM，这些细胞分别表达内源性 c-Met 变体 R988C 和 T1010I。 

 

　　Crizotinib克唑替尼 (PF-02341066) 还有效抑制 Karpas299 或 SU-DHL-1 ALCL 细胞中的 NPM-ALK 磷酸化，IC50 为 24 nM。PF-2341066 有效阻止细胞增殖，与 ALK 阳性 ALCL 细胞中的 G(1)-S 期细胞周期停滞和凋亡诱导相关，IC50 为 30 nM，但对 ALK 阴性淋巴瘤细胞无效。

 

　　MCE 尚未独立确认这些方法的准确性，仅供参考。

 

　　体内研究

 

　　Crizotinib克唑替尼 (PF-02341066) 显示出显著缩小大肿瘤 (> 600 mm³) 的能力，在 50 mg/kg/天 和 75 mg/kg/天 的治疗组中，在 GTL-16 模型中经过 43 天的给药方案后，平均肿瘤体积减少了 60%。在另一项研究中，PF-2341066 显示可完全抑制 GTL-16 肿瘤生长超过 3 个月，在 12 只小鼠中仅有 1 只表现出肿瘤生长的显著增加。观察到在 GTL-16 肿瘤中 12.5 mg/kg/天、25 mg/kg/天 和 50 mg/kg/天 的 CD31 阳性内皮细胞显著减少，表明血管密度 (MVD) 的抑制与抗肿瘤疗效呈剂量依赖性相关。PF-2341066 在 GTL-16 和 U87MG 模型中显著降低人 VEGFA 和 IL-8 血浆水平。在通过口服给药 PF-2341066 后，观察到 GTL-16 肿瘤中磷酸化 c-Met、Akt、Erk、PLCλ1 和 STAT5 水平的显著抑制。 相关产品推荐：ALK/ROS1抑制剂Lorlatinib中文名劳拉替尼

 

　　用 50 mg/kg PF-2341066 治疗 c-MET 放大 GTL-16 移植瘤引起的肿瘤退缩与 18F-FDG 摄取缓慢减少相关，并降低葡萄糖转运蛋白 1 (GLUT-1) 的表达。

 

　　MCE 尚未独立确认这些方法的准确性，仅供参考。

 

　　实验参考方法

 

　　激酶测定[1]

 

　　细胞在补充10%胎牛血清（FBS）的96孔板中接种，24小时后转移到无血清培养基中（含0.04%牛血清白蛋白BSA）。在研究配体依赖性RTK磷酸化的实验中，加入相应的生长因子，时间最长为20分钟。在与PF-2341066处理细胞1小时及/或适当配体处理指定时间后，用补充1 mM Na3VO4的HBSS洗涤细胞一次，然后从细胞中提取蛋白裂解液。随后，采用夹心ELISA方法评估选定蛋白激酶的磷酸化情况，具体捕获抗体用于包被96孔板，而检测抗体则特异于磷酸化的酪氨酸残基。抗体包被的板（a）在4°C下与蛋白裂解液共同孵育过夜；（b）在PBS中用1% Tween 20洗涤七次；（c）用辣根过氧化物酶标记的抗总磷酸酪氨酸（PY-20）抗体（1:500）孵育30分钟；（d）再次洗涤七次；（e）在3,3′,5,5′-四甲基苯胺过氧化物底物中孵育以启动比色反应，最后通过加入0.09 N H2SO4来终止反应；（f）使用分光光度计在450 nm处测量吸光度。

 

　　细胞测定[1]

 

　　肿瘤细胞在补充10% FBS的生长培养基中以低密度接种于96孔板，24小时后转移至无血清培养基（0% FBS和0.04% BSA）。向每个孔添加适当的对照或指定浓度的PF-2341066，并孵育24至72小时。人脐静脉内皮细胞（HUVEC）在EGM2培养基中以每孔超过20,000个细胞接种于96孔板，培养5至6小时后转移至无血清培养基过夜。第二天，向每个孔添加适当的对照或指定浓度的PF-2341066，在孵育1小时后，于指定孔中添加100 ng/mL的HGF。进行3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑溴化物测定，以确定相对肿瘤细胞或HUVEC数量。

 

　　动物给药[1]

 

　　将患有异种移植瘤的无胸腺小鼠（肿瘤体积300-800 mm³）以指定剂量通过口服灌胃给予PF-2341066。按照PF-2341066给药后的指定时间，人道处死小鼠，并切除肿瘤。肿瘤被迅速冷冻并使用液氮冷却的研磨器和杵研磨，生成蛋白裂解液，并使用BSA测定法确定蛋白浓度。使用捕获ELISA或免疫沉淀-免疫印迹法确定总蛋白和磷酸化蛋白的水平。 相关产品推荐：Alectinib艾乐替尼

 

　　MCE尚未独立确认这些方法的准确性，仅供参考。

 

　　参考文献

 

　　[1]. Zou HY, et al. An orally available small-molecule inhibitor of c-Met, PF-2341066, exhibits cytoreductive antitumor efficacy through antiproliferative and antiangiogenic mechanisms. Cancer Res. 2007, 67(9), 4408-4417.

 

　　[2]. Christensen JG, et al. Cytoreductive antitumor activity of PF-2341066, a novel inhibitor of anaplastic lymphoma kinase and c-Met, in experimental models of anaplastic large-cell lymphoma. Mol Cancer Ther. 2007, 6(12 Pt 1), 3314-3322.

 

　　[3]. Cui JJ, et al. Structure based drug design of crizotinib (PF-02341066), a potent and selective dual inhibitor of mesenchymal-epithelial transition factor (c-MET) kinase and anaplastic lymphoma kinase (ALK). J Med Chem. 2011 Sep 22;54(18):6342-63.

 

　　[4]. Cullinane C, et al. Differential (18)F-FDG and 3'-deoxy-3'-(18)F-fluorothymidine PET responses to pharmacologic inhibition of the c-MET receptor in preclinical tumor models. J Nucl Med. 2011 Aug;52(8):1261-7

 

　　[5]. Shen A, et al. c-Myc alterations confer therapeutic response and acquired resistance to c-Met inhibitors in MET-addicted cancers. Cancer Res. 2015 Nov 1;75(21):4548-59.

 

　　[6]. Umapathy G, et al. The kinase ALK stimulates the kinase ERK5 to promote the expression of the oncogene MYCN in neuroblastoma. Sci Signal. 2014 Oct 28;7(349):ra102.

 

　　[7]. Tucker ER, et al. Immunoassays for the quantification of ALK and phosphorylated ALK support the evaluation of on-target ALK inhibitors in neuroblastoma. Mol Oncol. 2017 Aug;11(8):996-1006.

 

　　[8]. Liu H, et al. Identifying and Targeting Sporadic Oncogenic GeneticLiu H, et al. Identifying and Targeting Sporadic Oncogenic Genetic Aberrations in Mouse Models of Triple Negative Breast Cancer. Cancer Discov. 2018 Mar;8(3):354-369.