天然产物Withaferin A醉茄素A可以抑制NF-kB活性

　　Withaferin A 是一种天然产物，属于茄科植物 Withania somnifera 的主要活性成分。Withaferin A 具有多种生物活性，包括抗肿瘤、抗炎、抗氧化、免疫调节和神经保护等作用。Withaferin A 是从睡茄中分离到的甾体内酯，可以抑制 NF-kB 的活性，靶作用于波形蛋白 (vimentin)，具有抗炎，抗肿瘤等功效。Withaferin A 是内皮蛋白 C 受体 (EPCR) 脱落的抑制剂。

 

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　　生物活性

 

　　体外研究

 

　　Withaferin A具有抗炎活性，并通过阻止TNF诱导的Ik-B激酶β的活化，通过一种巯基烷基化敏感的氧化还原机制，强效抑制NF-kB的激活。

 

　　Withaferin A还具有抗癌活性。Withaferin A靶向IF蛋白质vimentin，在牛主动脉内皮细胞（BAECs）中以3μM的浓度引起vimentin丝聚集，并在内皮细胞中以10μM的浓度诱导vimentin的断裂。

 

　　Withaferin A（0.5、1.5μM）单独或与顺铂（CIS）联合使用能剂量依赖性地减少ALDH1阳性癌干细胞（CSCs）的肿瘤形成能力。

 

　　体内研究

 

　　Withaferin A (2 mg/kg, i.p.)在小鼠身上显示出通过vimentin具有强效的抗血管生成活性。与顺铂（CIS）结合使用的Withaferin A （2 mg/kg）调节ALDH1标记物的表达，并降低从小鼠肿瘤中收集的securin的表达水平。 同靶点NF-κB (核因子κB)产品推荐： TAK-243抑制剂

 

　　实验参考方法

 

　　细胞测定

 

　　卵巢上皮癌细胞系A2780在RPMI1640培养基中培养，该培养基中添加胰岛素（5 μg/mL），青霉素/链霉素（分别为100 IU/mL和100 μg/mL），以及来自Hyclone的10%胎牛血清（FBS）。Withaferin A、顺铂（CIS）和其他试剂均溶于二甲基亚砜（DMSO）中。顺铂每次都要新鲜配制。

 

　　动物给药

 

　　小鼠

 

　　该实验使用129/Svev背景下的Vim−/−呈纯合缺陷和Vim+/−呈杂合缺陷小鼠。简要来说，年龄在4到6周之间的小鼠通过腹腔注射氯胺酮和甲苯胺酮进行麻醉。角膜经过局部麻醉后，涂抹一滴稀释的0.15 M氢氧化钠眼药水并保持1分钟。随后立即用盐水充分冲洗角膜，并轻柔地刮去角膜和边缘的上皮组织。角膜经过阿托品眼药水处理，并覆盖托布拉霉素和红霉素抗生素眼膏。在角膜损伤康复后，给予Withaferin A或12-D WS（溶解于DMSO中，每千克体重给予2毫克）或对照组小鼠（给予DMSO）腹腔注射，然后每天注射一次，持续10天。将小鼠安乐死并取出眼球。将眼球的前房切成两半，制备角膜组织。将角膜组织用100%乙酸酮固定20分钟，PBS洗涤1小时，在4°C的1% BSA-PBS中进行18小时阻断。通过将组织在1% BSA-PBS中进行12小时的FITC标记的大鼠抗小鼠CD31抗体孵育，然后在4°C的1% BSA-PBS中进行24小时洗去，并用载玻片覆盖。荧光染色在显微镜上可见，并通过将数字图像导入到NIH ImageJ中进行定量。  相关产品推荐：BAY 11-7082

 

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