Rivaroxaban利伐沙班是凝血因子Xa(FXa)抑制剂

　　Rivaroxaban 是一种高效，选择性直接的凝血因子 Xa (FXa) 抑制剂，IC50 为 0.7 nM，Ki 为 0.4 nM。

 

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　　生物活性

 

　　体外研究

 

　　Rivaroxaban (BAY 59-7939)是一种口服的直接凝血因子Xa（FXa）抑制剂，用于预防和治疗动脉和静脉血栓形成。Rivaroxaban通过竞争性抑制人类FXa（Ki 0.4 nM），比其他丝氨酸蛋白酶选择性高出超过10,000倍；它也能抑制凝血酶原酶活性（IC50 2.1 nM）。Rivaroxaban在人类和兔子血浆中对内源性FXa的抑制作用更强（IC50 21 nM），而在大鼠血浆中的抑制作用较弱（IC50 290 nM）。它在人类血浆中表现出抗凝血效果，分别以0.23和0.69μM的浓度使凝血酶原时间（PT）加倍和活化部分凝血活酶时间延长。

 

　　体内研究

 

　　Rivaroxaban (BAY 59-7939)是一种强效选择性的直接FXa抑制剂，在体内具有良好的活性和口服生物利用度。通过静脉注射雄鹿素抑制剂（直到形成血栓之前），可以降低血栓形成（ED50 0.1 mg/kg），抑制FXa，并剂量依赖性地延长PT。在ED50下，PT和FXa的影响略微（分别增加1.8倍和抑制32%）。在0.3 mg/kg（几乎完全抑制血栓形成的剂量）下，Rivaroxaban中等程度地延长PT（3.2±0.5倍）并抑制FXa活性（65±3%）。

 

　　MCE尚未独立确认这些方法的准确性，仅供参考。

 

　　实验参考方法

 

　　激酶测定

 

　　使用96孔微孔板，在25°C下，通过使用显色或荧光底物测量Rivaroxaban（BAY 59-7939）对纯化的丝氨酸蛋白酶的活性。将酶与Rivaroxaban或其溶剂DMSO一起孵育10分钟。在加入底物后，通过Spectra Rainbow Thermo Reader在405 nm处连续监测颜色或荧光，或者通过SPECTRAfluor plus在630/465 nm处连续监测颜色或荧光，持续20分钟。以下缓冲液（最终浓度）中分析酶的活性：人FXa（0.5 nM），兔FXa（2 nM），大鼠FXa（10 nM），或尿激酶（4 nM）在50 mM Tris-HCl缓冲液（pH 8.3），150 mM NaCl和0.1％牛血清蛋白（BSA）中；Pefachrome FXa（50-800 μM）或chromozym U（250 μM）与凝血酶（0.69 nM），胰蛋白酶（2.2 nM）或纤溶酶（3.2 nM）在0.1 μM Tris-HCl缓冲液（pH 8.0）和20 mM CaCl2中；chromozym TH（200 μM），chromozym plasmin（500 μM）或chromozym trypsin（500 μM）与FXIa（1 nM）或APC（10 nM）在50mM磷酸盐缓冲液（pH 7.4），150 mM NaCl中；S 2366（150或500 μM）与FVIIa（1 nM）和组织因子（3 nM）在50 mM Tris-HCl缓冲液（pH 8.0），100 mM NaCl，5 mM CaCl2和0.3％ BSA；H-D-Phe-Pro-Arg-6-amino-1-naphthalene-benzylsulfon-amide H2O（100 μM），并测量3小时。FIXab/FX测定，包括在50 mM Tris-HCl缓冲液（pH 7.4），100 mM NaCl，5 mM CaCl2和0.1％ BSA中的FIXab（8.8 nM）和FX（9.5 nM），通过添加I-1100（50 μM）开始，并测量60分钟。对于FXa的抑制常数（Ki），根据Cheng-Prusoff方程计算（Ki=IC50/1+[S]/Km），其中[S]是底物浓度，Km是Michaelis-Menten常数。通过Lineweaver-Burk图确定Km。IC50是使对照的初始速度减少50％所需的抑制剂量。相关产品推荐：Heparin sodium salt肝素钠

 

　　动物给药

 

　　大鼠

 

　　使用空腹、雄性Wistar大鼠(HsdCpb:WU)。大鼠静脉淤积模型在麻醉大鼠(每个剂量组n=10只大鼠)中诱导血栓形成，稍作修改。暴露腹腔下腔静脉，并在左肾静脉分支以下放置两根松紧缝线(间隔8-10 mm)。利伐沙班溶于聚乙二醇/H2O/甘油(996 g/100 g/60 g)中，或者溶剂以静脉尾注方式给予15分钟后进行血栓诱导。血栓素(0.5 mg/kg)注射到股静脉中，在15秒后，将近端和远端的缝线系紧。15分钟后，取下结扎段，取出血栓并称重。在移除血栓之前立即通过心穿刺获取血样。

 

　　MCE未独立确认这些方法的准确性。仅供参考。