AZD3759说明书
2019-01-22 
MCE小分子
AZD3759 是一种有效的可渗透中枢神经系统的 EGFR 抑制剂。作用于 EGFRwt，EGFRL858R 和 EGFRexon 19Del，IC50 分别为 0.3，0.2 和 0.2 nM。
MCE 的所有产品仅用作科学研究，我们不为任何个人用途提供产品和服务
AZD3759的生物活性
体外
在2mM的ATP浓度下，EGFRwt，EGFRL858R和EGFRexon 19Del的IC50分别为102,7.6和2.4nM。 AZD3759还抑制H838wt，H3255L858R和PC-9exon 19Del中的pEGFR，IC50分别为64.5,7.2和7.4nM。 在细胞磷酸化研究中，AZD3759在EGFR激活突变细胞系中也表现出比EGFR野生型细胞系（H838细胞系）高9倍的抑制选择性[1]。
体内
在大鼠中以2mg / kg口服给药后，AZD3759的吸收迅速，在1.0小时时达到0.58μM的血液Cmax。 随后，AZD3759的血液浓度单指数下降，平均消除半衰期为4.3小时，接近于静脉内给药4.1小时所获得的相同参数。 大鼠口服剂量后的生物利用度为91％。 在单剂量静脉内输注和口服给药后测定雄性狗中AZD3759的血液药代动力学参数。 在狗中静脉注射IV后，AZD3759血液清除率确定为14mL / min / kg，分布容积为6.4L / kg。 其消除半衰期为6.2小时。 AZD3759的吸收很快，血液Cmax（698 nM）发生在0.5和1.5小时之间。 AZD3759的口服生物利用度优异，为90％。 AZD3759显示出显着的剂量依赖性抗肿瘤效力（在7.5mg / kg qd时肿瘤生长抑制率为78％，在治疗后4周时肿瘤消退为15mg / kg qd），体重减轻<20％，而厄洛替尼有限 效果在这个模型中。 在研究结束时，收集脑组织用于组织学评估。 通过AZD3759处理以7.5和15mg / kg的剂量观察到显着降低的肿瘤面积。 此外，在给药后1小时，通过单剂量的AZD3759以15mg / kg检测pEGFR的调节，这证实了AZD3759的靶标参与
实验参考方法
激酶测定[1]
AZL3759在来自Millipore激酶组的124种激酶中的每一种上以单一1μM浓度进行测试，ATP浓度在其相应的表观Km值的15μM内。 详细的方案可以从Millipore获得。 简言之，将重组激酶在含有肽底物和放射性标记的γ-33P-ATP的适当缓冲液中孵育，同时存在或不存在所需的抑制剂浓度。 通过添加ATP / Mg 2+混合物引发反应。 在室温下温育40分钟后，通过加入3％磷酸溶液终止反应。 将一部分反应混合物点在P30滤垫上以捕获肽，并用磷酸洗涤三次，每次5分钟，以除去非特异性γ-33P-ATP。 然后通过闪烁计数测量磷酸化的底物，其测定与对照反应相比的激酶活性抑制水平[1]。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
细胞分析[1]
通过MTS方法测定细胞增殖测定。 简而言之，将细胞接种在96孔板中（密度以允许在72小时测定期间进行对数生长）并在37℃和5％CO 2下孵育过夜。 然后将细胞暴露于浓度为30mM至0.3μM的化合物（例如AZD3759）72小时。 对于MTS终点，通过CellTiter AQueous Non-Radioactive Cell Proliferation Assay试剂测量细胞增殖。 使用Tecan Ultra仪器测量吸光度。 进行预测量测量，并使用吸光度读数确定将处理细胞的生长减少至未处理细胞的一半（GI50）值所需的浓度[1]。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
Animal Administration[1]
大鼠[1]
雄性Han Wistar大鼠口服给予1mg甲基纤维素中2mg / kg的AZD3759。 在给药后0.25,0.5,1,2,4和7小时，从小脑延髓池收集脑脊髓液（CSF），并通过心脏穿刺收集血液样品（>60μL/时间点/每个部位）， 分离EDTA凝固管，然后立即用3倍体积的水稀释。 收获脑组织并在3倍体积的100mM磷酸盐缓冲盐水（pH7.4）中匀浆。 在LC / MS / MS分析之前，所有样品都储存在-70°C。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
MCE 的所有产品仅用作科学研究，我们不为任何个人用途提供产品和服务
AZD3759的生物活性
体外
在2mM的ATP浓度下，EGFRwt，EGFRL858R和EGFRexon 19Del的IC50分别为102,7.6和2.4nM。 AZD3759还抑制H838wt，H3255L858R和PC-9exon 19Del中的pEGFR，IC50分别为64.5,7.2和7.4nM。 在细胞磷酸化研究中，AZD3759在EGFR激活突变细胞系中也表现出比EGFR野生型细胞系（H838细胞系）高9倍的抑制选择性[1]。
体内
在大鼠中以2mg / kg口服给药后，AZD3759的吸收迅速，在1.0小时时达到0.58μM的血液Cmax。 随后，AZD3759的血液浓度单指数下降，平均消除半衰期为4.3小时，接近于静脉内给药4.1小时所获得的相同参数。 大鼠口服剂量后的生物利用度为91％。 在单剂量静脉内输注和口服给药后测定雄性狗中AZD3759的血液药代动力学参数。 在狗中静脉注射IV后，AZD3759血液清除率确定为14mL / min / kg，分布容积为6.4L / kg。 其消除半衰期为6.2小时。 AZD3759的吸收很快，血液Cmax（698 nM）发生在0.5和1.5小时之间。 AZD3759的口服生物利用度优异，为90％。 AZD3759显示出显着的剂量依赖性抗肿瘤效力（在7.5mg / kg qd时肿瘤生长抑制率为78％，在治疗后4周时肿瘤消退为15mg / kg qd），体重减轻<20％，而厄洛替尼有限 效果在这个模型中。 在研究结束时，收集脑组织用于组织学评估。 通过AZD3759处理以7.5和15mg / kg的剂量观察到显着降低的肿瘤面积。 此外，在给药后1小时，通过单剂量的AZD3759以15mg / kg检测pEGFR的调节，这证实了AZD3759的靶标参与
实验参考方法
激酶测定[1]
AZL3759在来自Millipore激酶组的124种激酶中的每一种上以单一1μM浓度进行测试，ATP浓度在其相应的表观Km值的15μM内。 详细的方案可以从Millipore获得。 简言之，将重组激酶在含有肽底物和放射性标记的γ-33P-ATP的适当缓冲液中孵育，同时存在或不存在所需的抑制剂浓度。 通过添加ATP / Mg 2+混合物引发反应。 在室温下温育40分钟后，通过加入3％磷酸溶液终止反应。 将一部分反应混合物点在P30滤垫上以捕获肽，并用磷酸洗涤三次，每次5分钟，以除去非特异性γ-33P-ATP。 然后通过闪烁计数测量磷酸化的底物，其测定与对照反应相比的激酶活性抑制水平[1]。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
细胞分析[1]
通过MTS方法测定细胞增殖测定。 简而言之，将细胞接种在96孔板中（密度以允许在72小时测定期间进行对数生长）并在37℃和5％CO 2下孵育过夜。 然后将细胞暴露于浓度为30mM至0.3μM的化合物（例如AZD3759）72小时。 对于MTS终点，通过CellTiter AQueous Non-Radioactive Cell Proliferation Assay试剂测量细胞增殖。 使用Tecan Ultra仪器测量吸光度。 进行预测量测量，并使用吸光度读数确定将处理细胞的生长减少至未处理细胞的一半（GI50）值所需的浓度[1]。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
Animal Administration[1]
大鼠[1]
雄性Han Wistar大鼠口服给予1mg甲基纤维素中2mg / kg的AZD3759。 在给药后0.25,0.5,1,2,4和7小时，从小脑延髓池收集脑脊髓液（CSF），并通过心脏穿刺收集血液样品（>60μL/时间点/每个部位）， 分离EDTA凝固管，然后立即用3倍体积的水稀释。 收获脑组织并在3倍体积的100mM磷酸盐缓冲盐水（pH7.4）中匀浆。 在LC / MS / MS分析之前，所有样品都储存在-70°C。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
