Sildenafil西地那非PDE5抑制剂

　　Sildenafil(UK-92480)是一种有效的磷酸二酯酶5(PDE5)抑制剂，IC50为5.22 nM。

 

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　　生物活性

 

　　体外研究

 

　　与单独使用5-羟色胺刺激相比，用1μM Sildenafil预处理可增强ERK1/ERK2的磷酸化，增加S期细胞百分比和细胞增殖(P<0.05)。用1μM枸橼酸Sildenafil预处理后进行血清素刺激可使OD值急剧增加至0.33，与单独进行血清素刺激相比有显著差异(P<0.05)。1μM Sildenafil明显增强5-羟色胺诱导的ERK1/ERK2磷酸化上调。

 

　　体内研究

 

　　在勃起的狗模型中，与载体相比，Sildenafil显著增加ICP和ICP/BP，但对BP没有显著影响。Sildenafil处理显著减少TL+-细胞的数量，剂量为10 mg/kg。在pMCAo后8天，Sildenafil处理(0.5和/或10 mg/kg剂量)显著减少了被Iba-1染色的小胶质细胞/巨噬细胞数量。据报道，在临床前动物模型中，Sildenafil可通过增加生长因子(FGF和VEGF)的分泌来减少皮瓣坏死，并且在组织学上显示其对大鼠海绵状神经结构有效。

 

　　实验参考方法

 

　　细胞检测

 

　　约90%传代的细胞用0.1%胰酶/0.01%乙二胺四乙酸(EDTA)溶液收集，并种植到96孔板中，每孔的密度为2×104个细胞，并在含有10%胎牛血清的RPMI-1640培养基中培养三天，然后进行血清饥饿处理三天。随后，细胞被孵育在含有不同浓度的血清素或1μM西地那非的环境中，根据需要，孵育过程中可能加入或不加入U0126。对照组的细胞以相同方式处理，只是将药物替换为无菌PBS。处理后，将培养基更换为新鲜的培养基，并将细胞与5g/L的MTT孵育四小时。然后使用150μL的10%DMSO将MTT溶解20分钟。使用微孔板读数器测定96孔板中的光学密度(OD)，波长为570nm。相关产品推荐：IBMX(PDE)抑制剂

 

　　MCE并未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

 

　　动物实验操作

 

　　小鼠实验

 

　　在出生（P）第9天，以永久性中脑动脉闭塞(pMCAo)方法诱导C57Bl/6小鼠的缺血，并随后进行PBS或西地那非的腹腔注射。在第一组实验中，动物被随机分为五组，治疗方法是在pMCAo后5分钟内给予PBS或单次剂量的西地那非柠檬酸盐（0.5、2.5、10和15 mg/kg），方式为腹腔注射(i.p.)。在第二组实验中，动物被随机分为三组，治疗方法是在pMCAo后5分钟内给予PBS或单次剂量的西地那非柠檬酸盐（0.5和10 mg/kg，腹腔注射）。相关产品推荐：Roflumilast罗氟司特

 

　　大鼠实验

 

　　使用30只体重在210和240克之间的雄性斯普拉格-道利大鼠。所有组的大鼠都用昔洛酮+氯胺酮麻醉，然后通过使用一分钟长的血管钳对右侧坐骨神经产生压迫伤害。手术前一天，第一组大鼠开始接受为期28天的治疗，每天通过鼻胃管口服20 mg/kg体重的西地那非，而第二组大鼠开始接受每隔一天口服10 mg/kg体重的西地那非柠檬酸盐。第三组大鼠没有接受任何药物治疗。所有3组的受试者都可以随意食用普通大鼠饲料和自来水。在产生神经损伤后的42天，大鼠进行了静态坐骨神经指数（SSI）测试、镇静和运动协调测试以及加速旋转杆测试。在麻醉下对大鼠实施安乐死并手术取出其坐骨神经。然后对神经进行组织病理学分析，并对肢体进行骨密度测评。

 

　　MCE并未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。