四氢尿苷Tetrahydrouridine dihydrate是CDA抑制剂

　　Tetrahydrouridine dihydrate(THU dihydrate)是一种有效的胞苷脱氨酶(CDA)抑制剂，竞争性阻断酶的活性位点。

 

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　　生物活性

 

　　体外研究

 

　　四氢尿苷（THU）是胞苷脱氨酶（CDA）的特异性抑制剂，可以抑制像阿拉C和Gemcitabine这样的细胞毒性脱氧胞苷类似物的代谢中的脱氨作用。为了测试四氢尿苷如何影响Gemcitabine对胰腺和肺癌细胞的抗肿瘤效应，进行了联合治疗。如预期的那样，BxPC-3和H441中高CDA表达会在100µM四氢尿苷处理后改善Gemcitabine的敏感性。BxPC-3和H441细胞系的敏感性分别提高约2.1倍和4.4倍。另一方面，MIAPaCa-2和H1299细胞在低CDA表达下意外地对Gemcitabine变得更敏感。MIAPaCa-2和H1299细胞显示IC50变化分别为2.2和2.3倍。然而，Panc-1和H322细胞在药物敏感性上没有显示出显著的变化。这些数据表明，四氢尿苷可以使一些胰腺和肺癌细胞对Gemcitabine诱导的细胞死亡敏感，而不论CDA的表达水平。四氢尿苷抑制S期，但没有发生凋亡。

 

　　MCE并未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

 

　　体内研究

 

　　应用167 mg/kg四氢尿苷（THU）后跟随1.0 mg/kg DAC导致一只雄性和八只雌性死亡。按计划结束生存的动物通常无症状，且在体重，食物消耗，临床化学检查和尿液分析中未观察到与治疗相关的效应，用于与167 mg/kg四氢尿苷结合的1.0 mg/kg DAC的处理。

 

　　MCE并未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

 

　　实验参考方法

 

　　细胞测定

 

　　使用96孔板中的比色甲基蓝测定法对胰腺和肺癌细胞系的细胞生长进行测定，密度为每孔5000个细胞。细胞或者暴露于四氢尿苷（100µM），或者不暴露在其中，计算开始的12小时为第0天。从三个不同的孔中复制三次，用四天的时间来计算平均值。

 

　　动物给药

 

　　小鼠

 

　　单独将CD-1小鼠（雄性30-38g，雌性24-31g）放置在悬挂在不锈钢架上的聚碳酸酯笼中，底部铺设有SaniChip认证的硬木床铺。小鼠被分配到四个剂量组和一个车载对照组。在给予THU或其载体1小时±5分钟后，以10 mL/kg的剂量体积通过口服管灌流DAC或其载体。DAC的剂量选择基于全面找到的研究，其中小鼠能够耐受六个口服剂量（每周两次）的0.1、0.2和0.4 mg/kg DAC，与固定剂量的167 mg/kg THU一起使用。选择固定剂量的四氢尿苷（500 mg/m2）和四氢尿苷与DAC给药之间的最佳时间（60分钟）。将小鼠每单位体表面积剂量（mg/m2）转换为每公斤体重剂量（mg/kg）的估计是基于从美国食品药品监督管理局发布的指南中获得的对小鼠的Michaelis常数（km）值。简而言之，以体表面积（500 mg/m2）计算的小鼠剂量被3的km值除以，将剂量转化为以每公斤体重（167 mg/kg）计算的剂量。

 

　　MCE并未独立验证这些方法的准确性。它们仅供参考。