Aloxistatin阿洛司他丁是一种半胱氨酸蛋白酶抑制剂

　　Aloxistatin(E64d)是可渗透细胞,不可逆的广谱半胱氨酸蛋白酶(cysteine protease)抑制剂。Aloxistatin(E64d)可抑制MERS-CoV。

 

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　　Aloxistatin阿洛司他丁的生物活性

 

　　体外研究

 

　　Aloxistatin(E64d)抑制蛋白酶抗性朊病毒蛋白(PrP-res)在ScNB细胞中的积累，IC50为0.5±0.11μM。对于细胞表面PrP-sen检测，PrP-sen从经过磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C(PIPLC)处理的培养基中免疫沉淀，以从细胞表面释放脉冲-35S-标记的PrP-sen。

 

　　除了对照细胞，所有细胞的标记培养基中的Aloxistatin分别维持在15μM。当与NK-92或YT 5细胞预孵育时，Aloxistatin(E64d)(特异性阻断半胱氨酸蛋白酶，但不阻断丝氨酸蛋白酶，如颗粒酶)能够完全阻断CatL底物Z-Phe-Arg-aminomethylcoumarin的周转。相关产品推荐：Dexamethasone价格

 

　　Aloxistatin(E64d)是一种广谱的细胞渗透性半胱氨酸蛋白酶抑制剂

 

　　体内研究

 

　　Aloxistatin(E64d)(灌胃)会导致豚鼠的脑、CSF和血浆Aβ(40)和Aβ(42)剂量依赖性减少。Aloxistatin还引起脑CTFβ的双相剂量依赖性减少。Aloxistatin导致脑sAβPPα剂量依赖性增加。平均sAβPPα水平显著高于5 mg/kg/天或更大的Aloxistatin剂量的无剂量组，最高Aloxistatin剂量导致sAβPPα的最大增加比对照组高约54%。与Aβ效应类似，口服Aloxistatin会产生双相剂量依赖性脑组织蛋白酶B活性降低。最低有效剂量约为1 mg/kg/天，最高Aloxistatin剂量导致脑组织蛋白酶B活性的最大降低，比对照组低约91%。因此，Aloxistatin降低豚鼠脑组织蛋白酶B活性的方式与化合物抑制组织蛋白酶Bβ-分泌酶活性的方式一致。

 

　　Aloxistatin(E64d)抑制大鼠AT1AR和ACE基因表达的增加。RNH-6270或Aloxistatin的给药减少了HF大鼠心肌内冠状动脉超氧化物产生的增加

 

　　实验参考方法

 

　　动物给药

 

　　小鼠和猪

 

　　使用豚鼠（雄性，Hartley品系，平均体重400克，相当于约6周大的动物）。使用表达人类AβPP的转基因小鼠，含有wtβ-分泌酶位点和London突变β-分泌酶位点序列。通过灌胃给药具有剂量准确的优势，但会造成创伤，因此只适用于相对较短的给药期（最长约一周）。豚鼠研究采用灌胃给药方式。Aloxistatin以甲基亚硫酸二甲酯(Me2SO)悬浊液的形式，按照指示的浓度（0.1、1.0、5和10 mg/kg）进行灌胃给药，每天一次，使用喂食管进行。对照组动物则仅通过灌胃给药Me2SO。

 

　　大鼠

 

　　使用雄性纯合DS大鼠。断奶后的大鼠被喂养含0.3％NaCl的实验饲料，直到7周龄。从7周龄起，DS大鼠被喂养含8％NaCl的饲料，12周时出现代偿性浓缩左心室（LV）肥厚，伴随高血压，在19周时出现明显的致命性LV衰竭和肺充血阶段。因此，从7周龄开始，DS大鼠被喂养含8％NaCl的饲料，并且从12到19周龄被随机分为HF组、Aloxistatin组（每日体重10mg/kg，每隔一天腹腔注射给药）或RNH-6270组（每日3mg/kg，混入饲料中），每组10只大鼠。RNH-6270（一种ARB）和Aloxistatin的剂量是通过初步实验和前期研究确定的。以0.3％NaCl饲料维持的DS大鼠作为年龄匹配的对照组（对照组，每组10只）。在19周龄时，使用NSC 10816（50 mg/kg）进行腹腔过量注射使所有大鼠安乐死，取出心脏进行生物学和组织学分析。从腹主动脉收集动脉血样品以测定肾素活性。从7周龄起，每周使用无创尾缘法测量有意识大鼠的收缩压和心率。在另外的实验中，从7周龄开始，接受低盐饮食的12周龄DS大鼠以与上述实验相同的方式给予对照、RNH-6270或Aloxistatin（每组5只），并将用于测定靶向mRNA和蛋白水平的LV组织立即置于液氮中并储存在-80°C。

 

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