Belinostat贝利司他是一种有效的HDAC抑制剂

　　Belinostat(PXD101;PX105684)是一种有效的HDAC抑制剂，在HeLa细胞提取物中的IC50为27 nM。

 

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　　生物活性

 

　　体外研究

 

　　贝利霉素(PXD101)对肿瘤细胞系产生浓度依赖性（0.2-5μM）的组蛋白H4乙酰化增加。在体外，贝利霉素对多种肿瘤细胞系具有细胞毒作用，其IC50范围为0.2-3.4μM，这是通过克隆形成试验确定的，并且可以诱导凋亡。贝利霉素能抑制多种人类肿瘤细胞系在体外的生长，其IC50值由克隆形成试验确定，范围在0.2-3.4μM。贝利霉素(PXD101)是一种强力的组蛋白去乙酰酶(HDAC)抑制剂，能强力抑制纯化的重组HDAC6的酶活性（IC50为82 nM)。

 

　　体内研究

 

　　用贝利司他（Belinostat，每日10-40 mg/kg i.p.）连续7天处理携带人类卵巢和结肠肿瘤异种移植物的裸鼠，可以导致显著的剂量依赖性生长延迟，且对小鼠没有明显的毒性迹象。顺铂耐药卵巢肿瘤细胞的异种移植物也观察到了生长延迟。在用贝利司他（PXD101）治疗后3小时，小鼠的血液和肿瘤中检测到H4乙酰化的明显增加。贝利司他（PXD101）抑制人类肿瘤异种移植物在小鼠中的生长，无明显毒性。贝利司他(PXD101)对人类A2780卵巢癌皮下异种移植物显示出单一药物的抗肿瘤活动，与卡铂联合治疗可增强其效果。相关产品推荐：Vorinostat

 

　　实验参考方法

 

　　激酶测定

 

　　对于活性测定，反应在总体积150μL的缓冲液中进行，该缓冲液含有60 mM Tris(pH 7.4)和30%甘油，并含有2μL细胞提取物，如果使用，还包括2μL贝利司他。通过添加2μL[3H]标记底物（乙酰化组蛋白H4肽，对应于20 NH2末端残基）来开始反应。样品在37°C下孵育45分钟，然后通过加入盐酸和乙酸（最终浓度分别为0.72 M和0.12 M）来停止反应。释放的[3H]醋酸被提取到750μL的乙酸乙酯中，然后样品在12,000×g下离心5分钟。上层相（600μL）转移到3 mL的闪烁液中并计数。相关产品推荐：Sulforaphane是HDAC抑制剂

 

　　细胞测定

 

　　人类卵巢细胞系A2780以及顺铂(A2780/cp70)和阿霉素(2780AD)抗性衍生物在RPMI 1640中培养，并补充谷氨酰胺(2 mM)和FCS（10%）。人类结肠癌(HCT116和HT29)、黑色素瘤(HS852)、前列腺癌(PC3)、肺癌(CALU-3)、乳腺癌(MCF7)细胞系在RPMI 1640中培养，其余在DMEM培养基中培养并提供相同的补充物。人类非小细胞肺癌细胞系WIL在DMEM培养基中培养并提供相同的补充物。通过集落形成试验确定药物敏感性。简单来说，细胞在5毫升的培养基中以每25平方厘米8×104个细胞的密度进行板培，并允许其附着和生长48小时。然后将细胞暴露于贝利那司他（从0.016到10微摩尔的五种浓度）24小时。首先移除培养基，然后在每个烧瓶中加入1毫升的胰酶/EDTA。一旦细胞脱离，再加入1毫升的培养基，再次悬浮细胞，同时计算无处理对照组烧瓶中的细胞数量。细胞被稀释并分布到6厘米的培养皿中（每个烧瓶有三个），每盘的密度为500-2000个细胞/盘，具体取决于细胞株。药物处理组的烧瓶中的细胞也以相同方式稀释和分布。培养皿在37°C下孵化10-15天。用PBS洗涤细胞，用甲醇固定，并用结晶紫染色，然后计数包含≥50个细胞的集落。敏感性表示为IC50（三次实验的平均值±标准差），定义为减少集落数量至对照组未处理细胞的50%所需的药物浓度。

 

　　动物实验

 

　　小鼠

 

　　对于人类肿瘤移植瘤研究，我们使用胰蛋白酶/EDTA（在PBS中的浓度为0.25%/1mM）收集单层培养细胞，并将其悬浮在PBS中。大约有10^7个细胞通过皮下注射的方式输入到免疫缺陷裸鼠（CD1 nu/nu mice）的右侧腹壁。当平均肿瘤直径达到或超过0.5厘米后（通常需要10-15天），将动物随机分成六组进行实验。Belinostat首先溶解在DMSO中，然后用水稀释，使最终的DMSO浓度达到10%，并在指定的时间通过腹腔给药。这种配方可以保证≤40 mg/kg剂量的足够溶解性。每日称量小鼠体重，并通过卡尺测量估算肿瘤体积，假设肿瘤是球形的（体积=d^3×π/6）。