SM-164 用作 XIAP 的强效拮抗剂

　　=SM-164 是一种可渗透细胞的 Smac 类似物。SM-164 与含有 BIR2 和 BIR3 结构域的 XIAP 蛋白结合，IC50 值为 1.39 nM，SM-164 用作 XIAP 的强效拮抗剂。

 

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　　生物动态

 

　　体外研究

 

　　SM-164 是一种非肽、细胞可渗透的二价小分子，它模拟 Smac 蛋白以靶向 XIAP。SM-164 与包含两个 BIR 域和 IC 的 XIAP 结合50值为 1.39 nM，分别是其单价对应物和天然 Smac AVPI 肽的 300 和 7000 倍。SM-164 同时与 XIAP 中的两个 BIR 结构域相互作用，并在无细胞功能和基于细胞的测定中作为 XIAP 的超强拮抗剂发挥作用。SM-164 靶向细胞 XIAP 并在低至 1 nM 的浓度下有效诱导白血病癌细胞凋亡，同时在 10,000 nM 时对正常人原代细胞的毒性最小[1]. SM-164 与 XIAP、cIAP-1 和 cIAP-2 蛋白的结合亲和力是使用基于荧光偏振的测定法确定的。SM-164 有一个 K一世对含有 BIR2 和 BIR3 结构域的 XIAP 蛋白的 0.56 nM 值。SM-164 有一个 K一世对包含 BIR2 和 BIR3 结构域的 cIAP-1 蛋白的值为 0.31 nM。SM-164 与 cIAP-2 BIR3 蛋白结合，具有 K一世值为 1.1 nM。添加外源性 TNFα 可以显着增强这些 Smac 模拟物的活性，尤其是对于 SM-164，在 HCT116 和 MDA-MB-453 等耐药癌细胞系中

 

　　MCE 尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

 

　　体内研究

 

　　评估 SM-164 抑制肿瘤生长的能力。SM-164 在抑制肿瘤生长方面非常有效，并且能够在 MDA-MB-231 异种移植模型中实现肿瘤消退。在治疗期间用 1mg/kg SM-164 治疗完全抑制肿瘤生长。用 5 mg/kg 的 SM-164 治疗使肿瘤体积从 147±54 mm 减小3 在治疗开始时（第 25 天）至 54±32 毫米3在治疗结束时（第 36 天），减少了 65%。SM-164 的强抗肿瘤活性是持久的而不是短暂的。在治疗结束时 （P<0.01） 或当对照组中的肿瘤大小达到 750 mm 时，5 mg/kg 的 SM-164 在统计学上比泰索帝更有效3 （P<0.02）

 

　　MCE 尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

 

　　实验参考方法

 

　　激酶检测

 

　　开发了一组基于灵敏和定量荧光偏振 （FP） 的分析，以确定我们设计的 Smac 模拟物对 XIAP BIR3、包含 BIR2 和 BIR3 域的 XIAP、cIAP-1 BIR3、cIAP-1 包含 BIR2 和BIR3 结构域和 cIAP-2 蛋白。测量 XIAP BIR3 蛋白的基于 FP 的测定。简而言之，5-羧基荧光素与具有序列 （AbuRPFK-Fam） 的突变 Smac 肽的赖氨酸侧链偶联，该荧光标记肽（名为 SM5F）在基于 FP 的 XIAP BIR3 结合测定中用作荧光示踪剂。Kd该荧光示踪剂的值被确定为 17.9 nM 到 XIAP BIR3。在竞争性结合实验中，测试化合物与 30 nM XIAP BIR3 蛋白和 5 nM SM5F 在测定缓冲液（100 mM 磷酸钾，pH 7.5；100μg/mL 牛丙种球蛋白；0.02% 叠氮化钠）中孵育

 

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　　细胞检测

 

　　HCT116 结肠癌细胞用单独的SM-164（1、10 和 100 nM）、单独的 TNFα 或组合处理 48 小时。细胞生长抑制由 WST 测定确定

 

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　　动物实验方法

 

　　老鼠

 

　　携带 MDA-MB-231 异种移植肿瘤的SCID 小鼠（每组 8-10只）每天用 1 和 5 毫克/千克 SM-164或 7.5 毫克/千克泰索帝或载体对照静脉内治疗，5 天/周，持续 2 周。 每周测量三次肿瘤大小和动物体重

 

　　MCE 尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。