BX471是一种CCR1拮抗剂

　　BX471 （ZK-811752） 是以一种口服有效的，选择性，非多肽的 CCR1 拮抗剂，Ki 值为 1 nM，对其选择性是对 CCR2，CCR5 和 CXCR4 的 250 倍。

 

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　　生物活性

 

　　体外

 

　　BX471是有效的功能拮抗剂，因为它具有抑制多种CCR1介导的作用的能力，包括Ca2+动员，增加细胞外酸化率，CD11b表达和白细胞迁移。与28个G蛋白偶联受体相比，BX471对CCR1的选择性大于10,000倍。BX471也能够取代125I-MIP-1α/ CCL3以浓度依赖性方式与K结合到小鼠CCR1一世215±46nM。BX471浓度增加会抑制Ca2+ MIP-1α/ CCL3在具有IC的人和小鼠CCR1中诱导的瞬态50 分别为5.8±1 nM和198±7 nM。BX471（0.1-10μM）在分离的血液单核细胞中以剪切流形式显示了ILTES激活的微血管内皮对RANTES介导的抗剪切粘附的剂量依赖性抑制。BX471还抑制RANTES介导的T淋巴细胞与活化内皮细胞的粘附。

 

　　MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

 

　　体内

 

　　BX471（4 mg / kg，口服或静脉注射）在狗中具有口服活性，生物利用度为60％。此外，BX471可有效减轻多发性硬化症大鼠实验性过敏性脑脊髓炎模型的疾病。BX471（20 mg / kg，sc）在约30分钟后达到9μM的峰值血浆水平，并在2小时后迅速降至约0.4μM。从4到8个小时，药物血浆水平降至0.1μM或更低。用20 mg / kg的BX471治疗10天的小鼠显示，间质CD45阳性白细胞减少约55％。BX471对外周血中CCR5阳性CD8细胞的数量具有临界意义。与媒介物对照相比，BX471使UUO肾脏中FSP1阳性细胞的数量减少了65％。BX471预处理可减少缺血再灌注损伤后肾脏中巨噬细胞和中性粒细胞的积累

 

　　MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

 

　　BX471实验参考方法

 

　　禁食雄性比格犬（每个治疗组n = 3）通过口服管饲或通过头静脉静脉内注射以4 mg / kg的剂量给予BX471。将该化合物溶于40％环糊精水溶液中。在给药后6小时内，在指示的时间点利用颈内静脉中的留置导管收集系列血样。EDTA用作抗凝剂。将样品离心（在4°C下1000x g离心10分钟），将血浆冷冻保存，直至通过HPLC-MS（在正离子模式下运行的电喷雾模式）分析药物水平。通过向一部分血浆中添加四份含有固定量内标的冰冷甲醇，融化血浆样品并使其变性。通过5000×g离心去除所得的蛋白质沉淀，并直接分析上清液。同时，BX471的血浆校准标准品在相同的条件下在定量范围内制备，处理和分析。在这些分析中使用FISONS VG Platform单四极仪器，其电喷雾入口的工作电压为3.57 kV。色谱分离是通过YMC AQ十八烷基硅烷反相色谱柱（4.6×250 mm）按照短等度洗脱方法（35％甲醇，65％的水和0.1％的三氟乙酸）完成的。色谱柱后将总色谱柱流量（1 mL / min）分流，以50μL/ min的速度注入质谱仪。在色谱柱上进样50μL后，在7.5分钟/样品的总运行时间内收集色谱图。以单离子正电离模式收集离子。通过在定量范围内绘制内标峰与血浆标样中分析物之间的离子电流比，可生成用于定量的校准曲线。从曲线测量下的面积推算出口服有效成分百分比。使用WinNonLin 3.0版计算药代动力学参数。

 

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