AMG9810是TRPV1拮抗剂

    AMG9810是选择性和竞争性的香草素受体1 (TRPV1) 拮抗剂，对人类和大鼠TRPV1的IC50值分别为24.5 和 85.6 nM。

 

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    生物活性

 

    体外

 

    AMG9810是辣椒素活化的竞争性拮抗剂（人TRPV1的IC 50值为24.5±15.7 nM；大鼠TRPV1的IC 50值为85.6±39.4 nM），并阻断了所有已知的TRPV1活化方式，包括质子（大鼠TRPV1的IC 50值为294± 192 nM;人TRPV1，92.7±72.8 nM），热量（大鼠TRPV1的IC 50值，21±17 nM;人TRPV1，15.8±10.8 nM），以及内源性配体，如花and酰胺，N-花生四烯酸多巴胺和油烯多巴胺。AMG9810在大鼠背根神经节原代神经元培养物中阻断辣椒素引起的去极化和降钙素基因相关肽的释放。AMG9810抑制辣椒素，质子，热和内源性配体诱导的表达TRPV1的细胞吸收45 Ca 2+。

 

    体内

 

    AMG9810可有效防止辣椒素引起的眼部擦拭，并具有剂量依赖性，并且在足底注射完全弗氏佐剂引起的炎性疼痛模型中，它可逆转热痛觉过敏和机械痛觉过敏。在有效剂量下，AMG9810对运动功能没有任何明显影响。AMG9810是第一个肉桂酰胺TRPV1拮抗剂，据报道可在炎症性疼痛动物模型中阻断辣椒素诱导的擦眼行为和逆痛觉过敏。AMG9810，促进小鼠皮肤肿瘤的发展。AMG9810的局部应用导致表皮生长因子受体（EGFR）及其下游Akt /哺乳动物雷帕霉素（mTOR）信号通路的表达水平显着增加。

 

    实验参考方法

 

    激酶测定

 

    将96孔板中培养的成年大鼠背根神经节神经元用释放缓冲液洗涤两次以启动测定。通过将神经元与辣椒素在室温下孵育10分钟来诱导CGRP释放。将培养物与递增浓度的辣椒碱或AMG9810预孵育15分钟，然后在室温下将300 nM辣椒素活化10分钟。收集细胞外培养基，并使用市售试剂盒确定CGRP含量。

 

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

 

    细胞分析

 

    为了评估AMG9810的细胞毒性，用不同浓度的AMG9810（0.25、0.5、1、5μM）处理N / TERT1细胞，并培养不同的时间段（24、48、72 h）。将CellTiter 96 AQueous One溶液添加到每个孔中，然后将细胞在37°C，5％CO 2的培养箱中放置1小时。然后用酶标仪[2]在492和690 nm处测量吸光度。

 

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

 

    Animal Administration

 

    大鼠：AMG9810溶于DMSO。在腹膜内注射媒介物（DMSO）或AMG 9810之前，在30×30×30-cm的Plexiglas腔室内使大鼠适应30至45分钟。在5 s的时间内在大鼠右下腹象限进行注射。眼内施用辣椒素前15、30或60分钟收腹。用移液器眼内施用辣椒素（3μg/ 20μL，在10％乙醇/ PBS中的溶液）或媒介物（20μL，在10％乙醇/ PBS中的溶液），并在5分钟内计数前爪眼擦拭巾的数量间隔1分钟

 

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。