CTEP是mGluR拮抗剂

    CTEP(RO 4956371) 是一种新颖的，长效的，可口服的 mGlu5 受体别构拮抗剂，IC50 值为 2.2 nM，对其选择性是对其他 mGlu 受体的 1000 多倍。

 

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    体外

 

    CTEP（RO 4956371）在稳定表达人mGlu5的HEK293细胞中抑制quisqualate诱导的Ca 2+  动员，IC 50为11.4nM ，[3 H] IP积累，IC 50为6.4 nM。CTEP（RO 4956371）在稳定表达人mGlu5的HEK293细胞中抑制人mGlu5的组成活性约50％，IC 50为40.1 nM 。

 

    体内

 

    CTEP（RO 4956371）在0.1 mg / kg和0.3 mg / kg的剂量治疗小鼠焦虑症时具有显着活性。在大鼠Vogel冲突饮酒试验中，CTEP（RO 4956371）在0.3 mg / kg和1.0 mg / kg剂量下显着增加饮酒时间，而在较低剂量时则没有效果。CTEP（RO 4956371）（口服）的半衰期为18小时，基于血浆和全脑匀浆中总药物浓度的B / P比率在小鼠中为2.6。单次口服剂量4.5和8.7mg / kg CTEP（RO 4956371）配制成盐水/吐温载体中的微悬浮液后，给予成人C57BL / 6小鼠迅速吸收并在约30分钟后达到接近最大暴露。在成人小鼠中慢性施用，剂量为2mg / kg po，每48小时，持续2个月，达到240ng / g的最小CTEP（RO 4956371）脑暴露。3 H]ABP688在已知表达mGlu5的小鼠脑区域中，并且在全脑匀浆中测量的平均化合物浓度为77.5ng / g的剂量实现了50％的置换。CTEP（RO 4956371）（2mg / kg，po bid）在小鼠中每48小时实现不间断的mGlu5占有率。CTEP（RO 4956371）（2 mg / kg，po）治疗可纠正Fmr1敲除小鼠中海马长期抑郁，过度蛋白质合成和听源性癫痫发作。

 

    实验参考方法

 

    激酶测定

 

    对于所有过滤放射性配体结合测定，将表达靶受体或受体组合的膜制剂重悬于放射性配体结合缓冲液（15mM Tris-HCl，120mM NaCl，5mM KCl，1.25mM CaCl 2和1.25mM MgCl 2）中。pH7.4），将膜悬浮液与适当浓度的放射性配体和未标记的药物在96孔板中以200μL的总体积混合，并在适当的温度下孵育60分钟。在温育结束时，将膜过滤到Whatman Unifilter上，用含有0.1％聚乙烯亚胺的ish缓冲液（50mM Tris-HCl，pH7.4）与Filtermate 196收集器预孵育，并用冰冷的无水缓冲液洗涤三次。在每孔加入45μLMicroScint40并振荡20分钟后，在Topcount微孔板闪烁计数器上对捕获在过滤器上的放射性进行定量，并进行猝灭校正。在中试实验中确定每个测定的膜浓度和孵育时间。

 

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

 

    Animal Administration

 

    成年雄性Sprague-Dawley大鼠（体重约180-210g）和雄性NMRI小鼠（体重约25g）由Charles River提供。将大鼠分组饲养，并将小鼠单独饲养在控制温度（20-22℃）和12小时光照/黑暗循环（上午6:00点亮）的单独容纳室中。允许动物随意获取食物和水，但Vogel冲突饮酒测试中使用的除外，其中在训练期间水的获取受到限制，如下所述。所有制剂在用于载体前立即制备，由0.9％NaCl（w / v）和0.3％吐温80（v / v）溶液组成，用于口服CTEP（RO 4956371），MPEP，MTEP和fenobam; 0.9％NaCl溶液用于MPEP和MTEP静脉注射; 和30％N-甲基吡咯烷酮，42％羟丙基-γ-环糊精，静脉注射用于fenobam的28％水。对于大鼠，口服给药的给药量为5mL / kg，对于小鼠为10mL / kg，对于静脉内给药为2.5mL / kg，对于小鼠皮下应用为10mL / kg。

 

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。