Maraviroc马拉维若是CCR5拮抗剂

　　Maraviroc (UK-427857) 是选择性的 CCR5 拮抗剂，具有抑制 HIV 的活性。

 

　　MCE 的所有产品仅用作科学研究或药证申报，我们不为任何个人用途提供产品和服务

 

　　生物活性

 

　　体外研究

 

　　Maraviroc (UK-427857) 是一种选择性 CCR5 拮抗剂，具有有效的抗人类免疫缺陷病毒 1 型 (HIV-1) 活性。Maraviroc 抑制趋化因子诱导的细胞内钙再分布的下游事件，对 MIP-1β、MIP-1α 和 RANTES 的 IC50 范围为 7 至 30 nM。

 

　　Maraviroc (UK-427857) 在低纳摩尔浓度下对 HIV-1 Ba-L (一种实验室改造的 R5 菌株) 具有活性 (IC90)，在为期 5 天的抗病毒测定中使用分离的多个 (合并) 进行测量供体 PBMC (IC90，3.1 nM)、单供体 PBMC (IC90，1.8 nM) 或 PM-1 细胞 (IC90，1.1 nM)[1]。

 

　　体内研究

 

　　静脉内给药后大鼠和犬种的清除率值是中等到高 (分别为 74 和 21 mL/min/kg)。Maraviroc 在这两个物种中的分布容积也适中 (4.3 至 6.5 升/千克)。Maraviroc 的半衰期值在大鼠中为 0.9 小时，在狗中为 2.3 小时。给狗口服 (2 mg/kg) 后，Cmax (256 ng/mL) 发生在 1.5 小时。给药后，生物利用度为 40%。对于大鼠，对口服给药后门静脉中获得的浓度的研究表明，大约 30% 的给药剂量从肠道吸收[1]。在 DSS/TNBS 结肠炎和转移模型中，Maraviroc 通过选择性减少携带 CCR5 的白细胞的募集来减轻肠道炎症的发展[2]

 

　　实验参考方法

 

　　激酶测定[1]

 

　　125I标记的MIP-1α、MIP-1β和RANTES与CCR5的结合主要通过稳定表达该受体的完整HEK-293细胞或其膜制备来测量。简而言之，细胞重悬于结合缓冲液中（含有1 mM CaCl2、5 mM MgCl2和0.5%牛血清白蛋白[BSA]的50 mM HEPES，pH调整至7.4），使细胞密度达到2×10^6个细胞/mL。对于膜制备，PBS洗涤的细胞重悬于裂解缓冲液中（20 mM HEPES，1 mM CaCl2，每50 mL添加1片COMPLETE，pH 7.4；Boehringer）后，使用Polytron手持均质器进行均质化，超速离心（40,000× g，30分钟），并重悬于结合缓冲液中，使蛋白浓度达到0.25 mg/mL（每个96孔板的每孔使用12.5 μg的膜蛋白）。 125I放射性标记的MIP-1α、MIP-1β和RANTES在结合缓冲液中准备并稀释至最终浓度为400 pM用于检测。将适当的maraviroc稀释液加入每个孔中，终体积为100 μL，反应板在37°C下孵育1小时，然后通过预阻断和洗涤的Unifilter板过滤内容物，在过夜干燥后计数[1]。

 

　　MCE尚未独立确认这些方法的准确性，仅供参考。

 

　　细胞测定[1]

 

　　HEK-293细胞样品（100 μL，1×10^6个细胞/mL）接种到聚-D-赖氨酸涂层的板中，并在37°C下孵育过夜。可溶性重组人CD4 (sCD4)与HIV-1 gp120以1:1混合，稀释至培养基中的4.5 nM，并在室温下孵育15分钟，然后将其加入PBS洗涤的细胞中，同时添加maraviroc的稀释液以确定IC50。反应板在37°C下孵育1小时后洗涤。将Eu3+标记的抗gp120抗体（在测定缓冲液中1/500稀释）加入每个孔（50 μL），并孵育1小时。添加增强溶液（200 μL/孔）之前用洗涤缓冲液洗涤三次，然后测量Eu3+荧光（Victor2多标签计数器；“铕”协议）。非特异性结合被视为未预孵育sCD4的情况下，gp120与细胞孵育所测得的荧光[1]。

 

　　MCE尚未独立确认这些方法的准确性，仅供参考。

 

　　动物给药[1][2]

 

　　大鼠和狗[1]

 

　　进行临床前药代动力学研究，使用maraviroc对雄性Sprague-Dawley大鼠（静脉注射1 mg/kg体重和口服10 mg/kg；n=2）和雄性比格犬（静脉注射0.5 mg/kg和口服2 mg/kg；n=4）进行单次静脉和口服给药。采集给药后24小时内的血浆样本，并使用特定的高效液相色谱-串联质谱法测定未改变的maraviroc浓度。

 

　　小鼠[2]

 

　　从6-10周龄的CCR5-/-小鼠或野生型对照小鼠中收集脾细胞（每组n=8），并通过细胞分选分离出初始的CD4+ CD45RBhigh T细胞。随后将总计3×10^5 CD45RBhigh细胞通过静脉注射入Rag1-/-小鼠，并每20天进行称重和粪便评分评估IBD的发生情况。为了调查maraviroc是否能拯救由转移性结肠炎引起的肠道炎症，将CD4+ CD45RB-/- T细胞注射到Rag1-/-小鼠中，34天后随机分为对照组（无进一步处理，n=6）或给予maraviroc治疗，每日口服50 mg/kg的maraviroc（n=4），为期3周，每周5天。

 

　　MCE尚未独立确认这些方法的准确性，仅供参考。

 

　　参考文献

 

　　[1]. Dorr P, et al. Maraviroc (UK-427,857), a potent, orally bioavailable, and selective small-molecule inhibitor of chemokine receptor CCR5 with broad-spectrum anti-human immunodeficiency virus type 1 activity. Antimicrob Agents Chemother. 2005 Nov;49(11):472

 

　　[2]. Mencarelli A, et al. Highly specific blockade of CCR5 inhibits leukocyte trafficking and reduces mucosal inflammation in murine colitis. Sci Rep. 2016 Aug 5;6:30802.

 

　　[3]. Romero-Sánchez MC, et al. Effect of maraviroc on HIV-disease progression-related biomarkers. Antimicrob Agents Chemother. 2012 Nov;56(11):5858-64.

 

　　[4]. Huilin Mou, et al. NRSF and CCR5 Established Neuron-glia Communication during Acute and Chronic Stresses. Journal of Drug Metabolism & Toxicology. January 10, 2016.