cIAP1和XIAP拮抗剂BV6

　　BV6 是cIAP1 和 XIAP拮抗剂。

 

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　　生物活性

 

　　体外研究

 

　　HCC193细胞在MTS测定中的IC50为7.2μM，而H460细胞即使使用30μM BV6处理也无法减少到50%的存活率。给HCC193细胞注射1μM BV6后，1小时后能够完全耗尽cIAP1水平，而对XIAP水平的降低要等到添加药物后24小时才能观察到。类似地，用5μM BV6处理H460细胞后，1小时内可以完全耗尽cIAP1，并且开始在24小时后减少XIAP。在平行研究中，无论是在哪种细胞系中，用0.25μM BV6的小剂量处理都会降低cIAP1水平，而在5μM BV6时仍然存在微量的XIAP。HCC193细胞在与1μM BV6孵育12小时后，出现明显的剪切形态的caspase-3水平，而这个剪切形态的caspase-3水平会随着时间的推移在48小时内持续增加。将HCC193细胞用1μM BV6处理24小时后，相对于DMSO处理的细胞，存活曲线发生了显著的平移，DER=1.38 (p<0.05)。BV6（2和5μM）显著抑制异位和正常（无疾病和子宫肌瘤）的ESCs中的BrdU掺入。在用5μM BV6处理后，两组的BrdU掺入都观察到了约30%的降低。

 

　　MCE尚未独立验证这些方法的准确性。仅供参考。

 

　　体内研究

 

　　小鼠cIAP-1、cIAP-2和XIAP的表达在植入物的上皮细胞和间质细胞的细胞质中明显可见，而Survivin主要在细胞核中表达。BV6治疗4周减弱了IAPs表达的强度。病变的大小范围从约2到7毫米直径不等。囊肿的单层上皮细胞襯衬如图所示。免疫组化染色后，细胞角蛋白和微丝蛋白呈阳性染色，而钙调蛋白呈阴性染色。经过BV6治疗4周后，病变的总数量（4.6对2.8/只小鼠），平均重量（78.1对32.0毫克/只小鼠）和表面积（44.5对24.6平方毫米/只小鼠）明显少于对照组。在子宫内膜腺体上皮或间质中，Ki67阳性细胞的百分比在BV6治疗后下降。

 

　　实验参考方法

 

　　细胞检测

 

　　H460和HCC193细胞系以RPMI-1640培养基为基础并添加10%胎牛血清和1%青霉素/链霉素进行培养。细胞活力使用CellTiter 96水溶性非放射性细胞增殖试剂盒进行测量。每孔接种5000个细胞，分别进行三次重复。在细胞附着到孔中后，将不同浓度的BV6添加到不同的孔中。对照组暴露于相同浓度的DMSO。24小时后，向每个孔中加入333μg/mL MTS和25μM PMS。在37℃湿润的5% CO2培养箱中孵育2小时后，使用微孔板读取器在490nm处读取板子吸光度。通过将样品的吸光度与相应的对照组进行归一化计算得到个体样本的相对细胞存活率。IC50值使用Prism 5.01进行计算。对于TNFα中和抗体测定，细胞在暴露于1和5μM BV6的情况下，是否加入10μg/mL Infliximab进行了24小时后进行测定。在490nm处使用微孔板读取器读取板子。 相关产品推荐：Birinapant拮抗剂-TL32711比瑞那帕

 

　　MCE尚未独立确认这些方法的准确性，仅供参考。

 

　　动物实验

 

　　使用小鼠

 

　　使用6周龄的雌性小鼠（BALB/c）。24只小鼠通过1cm的纵向皮肤切口进行卵巢切除术，然后每周注射s.c.戊酸雌二醇（0.5µg/只/周），持续进行6周，直到诱导子宫内膜异位症结束。在卵巢切除术后两周，另外8只供体小鼠被人道安乐后取出子宫，用无菌盐水清洗去除多余组织。每个子宫都要纵向切开包括两个角，并用解剖剪切成直径为0.5mm的碎片。接受卵巢切除术的受体小鼠（n=16）使用戊巴比妥钠麻醉。制作0.5cm的下腹中线切口。每个受体小鼠接受纵切割并添加入500µl生理盐水中的供体子宫的一半（1：2供体子宫与宿主比例），注入到腹腔中，然后缝合腹腔。注入的子宫组织约重50mg/只。在接下来的4周里，受体小鼠分别用单次i.p.注射BV6（n=8；10mg/kg）或溶剂（n=8；1% DMSO）进行两次每周治疗。