LY231514培美曲塞Pemetrexed是一种叶酸拮抗剂

　　Pemetrexed(LY231514)是一种叶酸拮抗剂(antifolate)。Pemetrexed(LY231514)抑制胸苷酸合成酶(TS)，二氢叶酸还原酶(DHFR)和甘氨酰胺核苷酸甲酰转移酶(GARFT)，Ki分别为1.3 nM，7.2 nM和65 nM。

 

　　MCE的所有产品仅用作科学研究或药证申报，我们不为任何个人用途提供产品和服务

 

　　LY231514培美曲塞Pemetrexed是一种叶酸拮抗剂的生物活性

 

　　体外研究

 

　　Pemetrexed（LY231514）二钠是一种新型的传统抗叶酸药，其抗肿瘤活性可能源于通过其多酸代谢产物对几个关键的需要叶酸的酶的同时和多重抑制。Pemetrexed(LY231514)是已知的最好的FPGS酶基质之一（Km=1.6μM和Vmax/Km=621）。很有可能多聚酸化和LY231514的多酸代谢物在确定这种新药物的选择性和抗肿瘤活性方面扮演深远的角色。虽然LY23l5l4只适度地抑制TS(Ki=340 nM，重组小鼠)，但LY23l5l4的五聚酸盐更强大100倍(Ki=3.4 nM)，使得LY231514成为最强大的基于叶酸的TS抑制剂之一。

 

　　体内研究

 

　　接受PC61加上Pemetrexed治疗的小鼠群体比其他组显示出统计学上的更长生存期。在生存分析中，与单独接受PC61治疗、大鼠IgG加上Pemetrexed治疗，或者没有接受治疗的小鼠相比，接受PC61加上Pemetrexed治疗的小鼠群体表现出显著更好的生存情况。相关产品推荐：Lometrexol是抗GARFT抑制剂

 

　　LY231514培美曲塞Pemetrexed是一种叶酸拮抗剂的实验参考方法

 

　　激酶测定

 

　　通过在A298处监测从10-甲酰基-[6R,S]-5,6,7,8-四氢叶酸形成的[6S]-5,6,7,8-四氢叶酸，以测试AICARFT的抑制效果，所有实验在室温下进行。所有溶液在使用之前都用氮气冲洗过。反应溶液包含33毫摩尔Tris-Cl(pH 7.4)，25毫摩尔KCl，5毫摩尔2-巯基乙醇，0.05毫摩尔AICA核糖核苷酸和16纳摩尔（2毫单位/毫升）的AICARFT。使用的10-甲酰基-[6R,S]-5,6,7,8-四氢叶酸浓度为0.037、0.074和0.145 mM（分别为其Km值的0.61、1.23和2.45倍）。LY231514作为抑制剂，测试浓度为0.08-0.8 mM（四个浓度）。当使用LY231514的三酸和五酸盐作为抑制剂时，其浓度为0.0005-0.009 mM（八个浓度）。通过添加酶来启动酶测定。数据使用ENZFITTER程序进行竞争性抑制分析。

 

　　MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

 

　　细胞测定

 

　　生成剂量-反应曲线以确定抑制生长50%所需的浓度（IC50）。Pemetrexed最初在DMSO中溶解，浓度为4mg/mL，并进一步用细胞培养基稀释到所需浓度。将CCRF-CEM白血病细胞添加到24孔聚集板中，完全培养基内的最终浓度为每孔4.8×10^4个细胞，总体积为2mL。将不同浓度的试验化合物加入到复制的孔中，使得DMSO的最终体积为0.5%。将板子在37°C、5%CO2的空气环境中孵育72小时。孵育结束后，使用ZBI Coulter计数器确定细胞数量。孵育结束时，对照组孔通常含有4×10^5至6×10^5个细胞。在几项研究中，在300μM AICA、5μM胸苷、100μM嘌呤或5μM胸苷加100μM嘌呤的组合物存在下，确定每种化合物的IC50。

 

　　动物给药

 

　　小鼠

 

　　使用6-8周龄的雌性CBA小鼠和雌性NOD/SCID小鼠（NOD.CB17-Prkdcscid）。在肿瘤患有小鼠体内，通过腹腔注射给予Premetrexed（100 mg/kg），从第4天到第8天（连续5天）进行给药，以探索与抗-CD25 Ab或IgG对照相结合时的协同效应。在当前研究中使用的Premetrexed的剂量和计划是基于在小鼠中进行的以前的研究确定的。