Nirogacestat是一种γ-分泌酶抑制剂

　　Nirogacestat(PF-3084014)是一种有效的，具有口服活性的，可逆的非竞争性的选择性的γ-secretase抑制剂，IC50为6.2 nM。Nirogacestat抑制Notch信号通路，同时最小化胃肠道毒性。可用于研究Notch受体依赖性肿瘤。

 

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　　Nirogacestat是一种γ-分泌酶抑制剂的生物活性

 

　　体外研究

 

　　在使用从HeLa细胞获得的，经过洗涤剂溶解的膜进行Aβ产生的无细胞测定中，Nirogacestat（PF-03084014）对γ-分泌酶抑制的IC50确定为6.2 nM。在使用携带Notch1的异源二聚体化和PEST领域突变的HPB-ALL细胞进行Notch受体切割抑制的细胞检测时，细胞IC50确定为13.3 nM。Nirogacestat（PF-03084014）在HPB-ALL和TALL-1细胞中引起明显的caspase-3活性增加，以及在7天的处理后，引发裂解的PARP和裂解的caspase-3的诱导。同靶点产品推荐：MG-132蛋白酶体抑制剂

 

　　体内研究

 

　　Nirogacestat（PF-03084014）在14天两次每日剂量使用的情况下展现出强大的抗肿瘤活性。肿瘤生长抑制是剂量依赖的，最高剂量水平（150 mg/kg）可获取约92％的最大肿瘤生长抑制效果。在肿瘤生长抑制研究中，小鼠接受一周以上的两次每日重复剂量，当剂量低于100 mg/kg时，Nirogacestat（PF-03084014）被良好耐受，没有观察到显著的体重减轻、病态或死亡现象。然而，当剂量增加到150 mg/kg时，小鼠会出现腹泻和体重减轻（10-15％），大约在给药后10天。如果给予用药假期，经治疗动物的体重通常会恢复正常，这表明Nirogacestat（PF-03084014）的毒性是可逆的。

 

　　Nirogacestat是一种γ-分泌酶抑制剂的实验参考方法

 

　　细胞分析

 

　　细胞在96孔板中接种，每孔含2,000个（Sup-T1、Jurkat和DND-41）或10,000个（HPB-ALL或TALL-1）细胞，用含10%胎牛血清的生长培养基培养。Nirogacestat（PF-03084014）在DMSO中进行串行稀释，将适当的对照或指定浓度的Nirogacestat（PF-03084014）添加到每个孔中，并在37°C下孵育7天（最后的DMSO含量为0.1%）。同靶点产品推荐：Bafilomycin A1是V-ATPase抑制剂

 

　　在细胞中添加最终浓度为0.1 mg/mL的Resazurin，并孵育2到4小时。荧光信号以560 nm激发后在590 nm处读取。使用GraphPad Prism中的S型剂量-反应（可变斜率）计算IC50值。

 

　　动物实验

 

　　小鼠

 

　　使用无胸腺的雌性小鼠（nu/nu，6-8周）。为了评估抗肿瘤效果，肿瘤体积为150至300 mm3的动物被随机分组，接受载体（0.5%甲基纤维素）或Nirogacestat（PF-03084014）（150 mg/kg，用载体稀释），并通过口服灌胃给药。每2到3天获取动物体重和肿瘤测量数据。

 

　　使用游标卡尺测量并计算肿瘤体积（mm3）。在研究的最后一天，比较药物治疗组与载体治疗组，测量百分比（%）抑制值并进行计算。对于所有肿瘤生长抑制实验，每个剂量组使用8到10只小鼠。使用学生t检验来确定P值。

 

　　MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。