Pexacerfont拮抗剂溶解度

　　Pexacerfont 是一种选择性的促肾上腺皮质激素释放因子 (CRF1) 受体拮抗剂，作用于人 CRF1 受体，IC50 为 6.1±0.6 nM。

 

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　　生物活性

 

　　体外研究

 

　　Pexacerfont 对人类 CRF1 受体表现出强效且特异的抑制作用 (IC50=6.1 ± 0.6 nM)，而对 CRF 结合蛋白和生物胺受体的亲和力则低于 1000 倍 (IC50>1000 nM)[1]。

 

　　MCE 尚未独立验证这些方法的准确性。此信息仅供参考。

 

　　体内研究

 

　　Pexacerfont (BMS-562086) 在大鼠中（1-10 mg/kg，口服）在防御性撤退和 Elevated Plus Maze 焦虑模型中具有活性。在静脉注射给药后，大鼠、狗和黑猩猩的血浆 Pexacerfont 浓度呈多指数下降。Pexacerfont 的清除率 (CLp) 在大鼠 (17.9 mL/kg 每分钟) 和狗 (11.6 mL/kg 每分钟) 中高于黑猩猩 (2.0 mL/kg 每分钟)。假设 Pexacerfont 的 CLp 值近似于这三种生物的 CLb 值，Pexacerfont 在大鼠、狗和黑猩猩中的估计肝脏提取率分别为 0.32、0.38 和 0.08 （通过将 CLp 除以各自的肝血流量计算得出，分别为 55.2、30.9 和 25.5 mL/kg 每分钟）。在大鼠中假设 CLb 等于 CLp 是合理的，BMS-562086 等效放射性物质在给药后 1 小时的血浆与血液浓度比为 0.95[1]。

 

　　MCE 尚未独立验证这些方法的准确性。此信息仅供参考。

 

　　实验参考方法

 

　　细胞检测[1]

 

　　Caco-2 细胞在第 50 到 60 代时以 60,000 细胞/cm² 的密度接种于 24 孔 Transwell 板的聚碳酸酯膜上。细胞在含有 10% 胎牛血清、0.5 mM HEPES、1% 非必需氨基酸、1% L-谷氨酰胺、100 U/mL 青霉素-G 和 100 μg/mL 链霉素的 Dulbecco 改良 Eagle 培养基中培养 21 至 25 天。在渗透性研究之前，顶面 (AP) 和基底面 (BL) 培养基被替换为运输缓冲液（Hanks 平衡盐溶液，补充 2% N,N-二甲基乙酰胺，pH 7.4）。AP 到 BL 的渗透性研究通过用含 25 μM BMS-562086 的运输缓冲液替换 AP 培养基开始。所有渗透性实验均在 37°C 下进行。为了评估细胞单层的完整性，测量横腔电阻 (TEER) 值。TEER 值在每个实验开始和结束时获得。只有在整个实验过程中 TEER 值保持在 400 到 500 Ω/cm² 之间的孔才用于研究。甘露醇（25 或 100 μM）运输实验与其他运输实验以相同方式进行。甘露醇作为 Caco-2 细胞单层完整性的探针。

 

　　MCE 并未独立确认这些方法的准确性，仅供参考。

 

　　动物给药[1]

 

　　大鼠

 

　　一组雄性斯普拉格-道利大鼠（n=3，体重 0.34-0.35 kg）使用单颈静脉插管进行口服给药，第二组雄性斯普拉格-道利大鼠（n=3，体重 0.34-0.35 kg）使用双颈静脉插管进行静脉给药。所有大鼠在使用前禁食约 18 小时，给药后禁食 4 小时。提供自由饮水。Pexacerfont（BMS-562086）以 0.5% 水溶性甲基纤维素为载体，通过灌胃口服给予三只大鼠单次剂量 5 mg/kg。以 20% 乙醇生理盐水为载体，通过颈静脉插管给予三只大鼠 1 mg/kg 的 Pexacerfont 静脉推注剂量。通过颈静脉插管在给药后 0、0.08（仅限静脉给药）、0.17（仅限静脉给药）、0.25、0.5、0.75、1、2、4、8、12、24、48、72 和 96 小时收集血样（每个动物每个时间点 0.2 mL），以分析 Pexacerfont。通过在 5°C 下以 1000g 离心 10 分钟从血样中制备血浆。

 

　　MCE 并未独立确认这些方法的准确性，仅供参考。

 

　　溶解性数据

 

　　动物实验：

 

　　请根据您的 实验动物和给药方式 选择适当的溶解方案。

 

　　以下溶解方案都请先按照 In Vitro 方式配制澄清的储备液，再依次添加助溶剂：

 

　　——为保证实验结果的可靠性，澄清的储备液可以根据储存条件，适当保存；体内实验的工作液，建议您现用现配，当天使用；

 

　　以下溶剂前显示的百分比是指该溶剂在您配制终溶液中的体积占比；如在配制过程中出现沉淀、析出现象，可以通过加热和/或超声的方式助溶

 

　　方案 一

 

　　请依序添加每种溶剂： 10% DMSO  →  40% PEG300  →  5% Tween-80  →  45% Saline

 

　　Solubility: ≥ 2.5 mg/mL (7.34 mM); 澄清溶液

 

　　此方案可获得 ≥ 2.5 mg/mL（饱和度未知）的澄清溶液。

 

　　以 1 mL 工作液为例，取 100 μL 25.0 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀；再向上述体系中加入 50 μL Tween-80，混合均匀；然后再继续加入 450 μL 生理盐水 定容至 1 mL。

 

　　生理盐水的配制：将 0.9 g 氯化钠，溶解于 ddH₂O 并定容至 100 mL，可以得到澄清透明的生理盐水溶液。

 

　　参考文献

 

　　[1]. Zhou L, et al. In vitro and in vivo metabolism and pharmacokinetics of BMS-562086, a potent and orally bioavailable corticotropin-releasing factor-1 receptor antagonist. Drug Metab Dispos. 2012 Jun;40(6):1093-103.