Cyclopamine是Hedgehog通路的拮抗剂

    Cyclopamine 是 Hedgehog 通路的拮抗剂，在细胞实验中的 IC50 为 46 nM。

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    生物活性

    体外

    用小分子Hh抑制剂如HhAntag和天然产物Cyclopamine（均与Smo结合）治疗可诱导成神经管细胞瘤基因小鼠模型的肿瘤缓解。 环巴胺是一种Hedgehog（Hh）通路拮抗剂。环巴胺抑制细胞生长。环巴胺（3μM）抑制Hh通路活性和消化道肿瘤细胞系的生长与PTCHmRNA的表达相关。Cyclopamine是一种甾体生物碱，通过与Smo的直接相互作用抑制Hh信号传导。

    体内

    环巴胺导致异种移植肿瘤持续消退。环巴胺治疗动物的肿瘤完全消退12天。环巴胺（1.2mg）处理在移植入裸鼠后阻断人胰腺癌细胞的肿瘤形成

    溶剂溶解度

    体内：

    1、逐个添加每种溶剂：10％EtOH 90％（20％SBE-β-CD在盐水中）

    溶解度：1.67 mg / mL（4.06 mM）; 暂停解决方案; 需要超声波

    2、逐个加入每种溶剂：10％EtOH 90％玉米油

    溶解度：≥1.43mg / mL（3.47 mM）; 明确解决方案

    3、逐个加入每种溶剂：10％DMSO 90％玉米油

    溶解度：≥0.5mg / mL（1.21 mM）; 明确解决方案

    4、逐个添加每种溶剂：10％DMSO 40％PEG300 5％Tween-80 45％盐水

    溶解度：≥0.5mg / mL（1.21 mM）; 明确解决方案

    5、逐个添加每种溶剂：10％DMSO 90％（20％SBE-β-CD在盐水中）

    溶解度：≥0.5mg / mL（1.21 mM）; 明确解决方案

    实验参考方法

    细胞分析

    将细胞在96孔板中一式三份培养在测定培养基中，在0h以正文中指出的浓度加入5E1单克隆抗体，ShhNp和/或环巴胺（3μM）。 使用CellTiter96比色测定，通过在490nm（OD490）在2天和4天的光密度测量来确定活细胞质量。 相对生长计算为OD（第4天）-OD（第2天）/ OD（第2天）。

 
    Animal Administration

    小鼠

    将总共0.1mL Hanks'平衡盐溶液和含有2×106个细胞的基质胶（1：1）皮下注射到CD-1裸鼠中。 使肿瘤生长4天至最小体积125mm 3; 对所有受试者同时开始治疗。 每天皮下注射小鼠皮下注射载体（三油酸甘油酯：乙醇4：1v / v）或环巴胺悬浮液（每小鼠1.2mg，三油酸甘油酯：乙醇4：1v / v），持续7天。 在治疗期结束时，从小鼠切下肿瘤，称重，然后在4℃下用4％多聚甲醛固定3小时，包埋在石蜡中并切片（6μm）。 使用重组Tdt通过TUNEL鉴定凋亡细胞。 然后将切片用曙红复染。 从随机选择对应于两个对照和两个环巴胺处理的肿瘤的外部，中间和内部的区域的8×20-放大的视野。 我们手动计算了TUNEL阳性细胞核的数量。 进行苏木精/伊红染色。

    MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。