Fulvestrant是雌激素受体拮抗剂
2019-04-17 
MCE小分子
Fulvestrant是有效的雌激素受体 (Estrogen Receptor) 拮抗剂，IC50值为 9.4 nM
生物活性
体外
氟维司群（ICI 182,780）是雌激素作用的有效和特异性抑制剂，并且在人乳腺癌的细胞和动物模型中表现出优异的生长抑制作用。 氟维司群抑制MCF-7人乳腺癌细胞生长，IC50为290 nM。 与雌二醇相比，氟维司群的相对结合亲和力为0.89。 氟维司群具有显着增加的抗雌激素效力并保留纯雌激素拮抗剂活性。 氟维司群是新型内分泌治疗中的第一种 - 一种下调ER的雌激素受体（ER）拮抗剂。 用1μM他莫昔芬治疗MCF-7细胞对ERα的表达没有影响，而100nM氟维司群完全抑制ERα的表达。
体内
当单独给药时，肠胃外（sc），未成熟雌性大鼠氟维司群（ICI 182,780）缺乏子宫内活性，当与雌二醇共同给药时，它以剂量依赖的方式有效阻断雌二醇的子宫内酯作用（ED50：0.06 mg / kg /天sc）。 用0.5mg氟维司群/ kg /天s.c.的剂量实现雌激素作用的完全拮抗作用。 氟维司群对口服给药的影响 质量相似，但与s.c.相比，效力降低了一个数量级。 给药（ED50 0.46，完全拮抗作用，5mg / kg /天，口服）。 氟维司群的抗肿瘤活性首先在裸鼠的两种人乳腺癌模型中得到证实。 在这些模型之一中，通过用雌二醇连续治疗支持的MCF-7肿瘤异种移植物的生长在单次注射氟维司群5mg后完全阻断至少4周。 在Br10人类肿瘤模型中可以看到类似的生长减少。 在携带MCF-7异种移植物的裸鼠的其他研究中，氟维司群抑制已建立肿瘤的生长两倍，并且肿瘤生长延迟到比他莫昔芬治疗观察到的更大程度。 长期使用他莫昔芬治疗后，在他的裸鼠体内生长的他莫昔芬耐药性乳腺肿瘤仍然可以通过氟维司群抑制生长。 这些与对他莫昔芬和氟维司群观察到的肿瘤生长抑制（TGI）相当，其在第40天分别为86％和88％。
实验参考方法
细胞分析
在补充有10％FBS和10μg/ mL人胰岛素的EMEM生长培养基中，将MCF-7或T47D细胞在10cm培养皿中培养至~75％汇合。 处理前24小时，用不含酚红的RPMI-1640生长培养基替换生长培养基。 在DMSO中制备10mM RAD1901的储备溶液。 RAD1901的稀释液在RPMI生长培养基中制备（剂量范围为10至0.5nM）。 对照包括单独的0.1％DMSO（载体），1nM雌二醇（E2），100nM氟维司群和1μM他莫昔芬。 用RAD1901或对照处理细胞培养48小时，然后用冰冷的裂解缓冲液[1mM EDTA，0.5％Triton X-100,5mM NaF，6M尿素，1mM原钒酸钠，2.5孵育15分钟。 mM焦磷酸钠和1×HALT蛋白酶抑制剂混合物]。 将裂解物以2000g离心5分钟，并将上清液在裂解缓冲液中1：1稀释。 将96孔板用捕获抗体（1μg/ mL）包被过夜，在制造商的洗涤缓冲液中洗涤三次，用封闭缓冲液封闭2小时，并再次洗涤。 将制备的平板与100μL制备的细胞裂解物一起温育2小时，洗涤，与生物素化的检测抗体一起温育2小时，并再次洗涤。 与链霉抗生物素蛋白 - 辣根过氧化物酶温育20分钟后，洗涤平板并与底物溶液一起温育20分钟。 用终止溶液终止反应，并在酶标仪（OD450）上分析板。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
动物研究
大鼠
在用OVX大鼠进行的研究中，在治疗开始前至少2周进行手术准备。 为了测量单次大剂量氟维司群的作用持续时间，每天用s.c.治疗OVX大鼠。 剂量为0.5μg的雌二醇苯甲酸盐，从氟维司群给药当天开始，一直持续到阴道涂片显示出角质化的迹象。 此时终止实验并记录子宫重量。 在这些单剂量作用持续时间研究中使用的花生油配方含有50mg氟维司群/ mL。
小鼠
雌性无胸腺裸鼠[Crl：NU（NCr）-Foxn1nu]用于肿瘤异种移植研究。 肿瘤细胞植入后14天（指定为研究的第1天），小鼠为9周龄，体重范围为21.4至32.5g，个体肿瘤体积范围为75至144mm 3，组平均肿瘤体积（ MTV）108 mm3。 将小鼠随机分成9组，每组15只，用载体，他莫昔芬（每隔一天1mg /动物），氟维司群（0.5mg /每日动物）或RAD1901（0.3,1,3,10,30,60）治疗。 每天90和120毫克/千克）。 肿瘤体积每周评估两次。 肿瘤终点定义为对照组的MTV为1500mm 3。 还监测动物的部分消退（PR）和完全消退反应。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
生物活性
体外
氟维司群（ICI 182,780）是雌激素作用的有效和特异性抑制剂，并且在人乳腺癌的细胞和动物模型中表现出优异的生长抑制作用。 氟维司群抑制MCF-7人乳腺癌细胞生长，IC50为290 nM。 与雌二醇相比，氟维司群的相对结合亲和力为0.89。 氟维司群具有显着增加的抗雌激素效力并保留纯雌激素拮抗剂活性。 氟维司群是新型内分泌治疗中的第一种 - 一种下调ER的雌激素受体（ER）拮抗剂。 用1μM他莫昔芬治疗MCF-7细胞对ERα的表达没有影响，而100nM氟维司群完全抑制ERα的表达。
体内
当单独给药时，肠胃外（sc），未成熟雌性大鼠氟维司群（ICI 182,780）缺乏子宫内活性，当与雌二醇共同给药时，它以剂量依赖的方式有效阻断雌二醇的子宫内酯作用（ED50：0.06 mg / kg /天sc）。 用0.5mg氟维司群/ kg /天s.c.的剂量实现雌激素作用的完全拮抗作用。 氟维司群对口服给药的影响 质量相似，但与s.c.相比，效力降低了一个数量级。 给药（ED50 0.46，完全拮抗作用，5mg / kg /天，口服）。 氟维司群的抗肿瘤活性首先在裸鼠的两种人乳腺癌模型中得到证实。 在这些模型之一中，通过用雌二醇连续治疗支持的MCF-7肿瘤异种移植物的生长在单次注射氟维司群5mg后完全阻断至少4周。 在Br10人类肿瘤模型中可以看到类似的生长减少。 在携带MCF-7异种移植物的裸鼠的其他研究中，氟维司群抑制已建立肿瘤的生长两倍，并且肿瘤生长延迟到比他莫昔芬治疗观察到的更大程度。 长期使用他莫昔芬治疗后，在他的裸鼠体内生长的他莫昔芬耐药性乳腺肿瘤仍然可以通过氟维司群抑制生长。 这些与对他莫昔芬和氟维司群观察到的肿瘤生长抑制（TGI）相当，其在第40天分别为86％和88％。
实验参考方法
细胞分析
在补充有10％FBS和10μg/ mL人胰岛素的EMEM生长培养基中，将MCF-7或T47D细胞在10cm培养皿中培养至~75％汇合。 处理前24小时，用不含酚红的RPMI-1640生长培养基替换生长培养基。 在DMSO中制备10mM RAD1901的储备溶液。 RAD1901的稀释液在RPMI生长培养基中制备（剂量范围为10至0.5nM）。 对照包括单独的0.1％DMSO（载体），1nM雌二醇（E2），100nM氟维司群和1μM他莫昔芬。 用RAD1901或对照处理细胞培养48小时，然后用冰冷的裂解缓冲液[1mM EDTA，0.5％Triton X-100,5mM NaF，6M尿素，1mM原钒酸钠，2.5孵育15分钟。 mM焦磷酸钠和1×HALT蛋白酶抑制剂混合物]。 将裂解物以2000g离心5分钟，并将上清液在裂解缓冲液中1：1稀释。 将96孔板用捕获抗体（1μg/ mL）包被过夜，在制造商的洗涤缓冲液中洗涤三次，用封闭缓冲液封闭2小时，并再次洗涤。 将制备的平板与100μL制备的细胞裂解物一起温育2小时，洗涤，与生物素化的检测抗体一起温育2小时，并再次洗涤。 与链霉抗生物素蛋白 - 辣根过氧化物酶温育20分钟后，洗涤平板并与底物溶液一起温育20分钟。 用终止溶液终止反应，并在酶标仪（OD450）上分析板。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
动物研究
大鼠
在用OVX大鼠进行的研究中，在治疗开始前至少2周进行手术准备。 为了测量单次大剂量氟维司群的作用持续时间，每天用s.c.治疗OVX大鼠。 剂量为0.5μg的雌二醇苯甲酸盐，从氟维司群给药当天开始，一直持续到阴道涂片显示出角质化的迹象。 此时终止实验并记录子宫重量。 在这些单剂量作用持续时间研究中使用的花生油配方含有50mg氟维司群/ mL。
小鼠
雌性无胸腺裸鼠[Crl：NU（NCr）-Foxn1nu]用于肿瘤异种移植研究。 肿瘤细胞植入后14天（指定为研究的第1天），小鼠为9周龄，体重范围为21.4至32.5g，个体肿瘤体积范围为75至144mm 3，组平均肿瘤体积（ MTV）108 mm3。 将小鼠随机分成9组，每组15只，用载体，他莫昔芬（每隔一天1mg /动物），氟维司群（0.5mg /每日动物）或RAD1901（0.3,1,3,10,30,60）治疗。 每天90和120毫克/千克）。 肿瘤体积每周评估两次。 肿瘤终点定义为对照组的MTV为1500mm 3。 还监测动物的部分消退（PR）和完全消退反应。
MCE尚未独立确认这些方法的准确性。 它们仅供参考。
