拮抗剂Kynurenic acid 犬尿喹啉酸

　　Kynurenic acid 是一种内源性色氨酸代谢物，是针对靶点 NMDA, glutamate, α7 nicotinic acetylcholine receptor 的广谱性拮抗剂，Kynurenic acid 也是 GPR35/CXCR8 的激动剂。

 

　　MCE 的所有产品仅用作科学研究或药证申报，我们不为任何个人用途提供产品和服务

 

　　生物活性

 

　　体外研究

 

　　GPR35 作为犬尿氨酸通路中间体 Kynurenic acid 的受体发挥作用。在 G qi/o 嵌合 G 蛋白存在的情况下，Kynurenic acid 以 GPR35 依赖性方式引发钙动员和磷酸肌醇生成。Kynurenic acid 刺激 GPR35 表达细胞中的[35S]鸟苷 5'-O-(3-thiotriphosphate) 结合，百日咳毒素处理消除了这种作用。Kynurenic acid 还诱导 GPR35 的内化[1]。KYNA 的神经抑制特性及其神经保护和抗惊厥作用是使用毫摩尔范围内的化合物浓度发现的。这一点，以及 KYNA 对负责这些作用的三种离子型谷氨酸受体[NMDA、α-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazole propionic acid (AMPA) 和红藻氨酸盐]中每一种的低亲和力，一起随着哺乳动物大脑中 KYNA 浓度处于亚微摩尔范围内的认识，表明其他受体可能作为内源性 Kynurenic acid 的靶标。Kynurenic acid 具有较浅的抑制曲线和非竞争性拮抗培养的海马神经元上的 α7nAChRs，IC50 处于低微摩尔范围[2]。

 

　　体内研究

 

　　Kynurenic acid 影响小鼠外周血中白细胞的活性，尽管最低的 Kynurenic acid (2.5 mg/L) 的影响最大，而最高的 Kynurenic acid (250 mg/L) 的影响最弱。在给动物服用酸 7 天和 28 天后，最低剂量的 Kynurenic acid 会刺激 T 淋巴细胞的增殖反应 (p<0.05)[3]。

 

　　实验参考方法

 

　　激酶测定[1]

 

　　在收获之前，CHO-GPR35稳定细胞被以或不以百日咳毒素（100 ng/mL）预处理16小时。细胞在10 mM Tris-HCl（pH 7.4）、1 mM EDTA中重悬和匀浆，然后在4 °C下以1000 ×g离心10分钟去除细胞核和细胞碎片。通过将上清液以38,000 ×g离心30分钟并在20 mM HEPES（pH 7.5）和5 mM MgCl2中重悬来收集膜部分。取25 μg的膜在室温下与含3 μM GDP和0.1 nM [35S]GTPγS的酶反应缓冲液（20 mM HEPES、5 mM MgCl2、0.1% bovine serum albumin，pH 7.5）一起孵育1小时，同时存在或不存在犬尿酸。通过GF/B滤纸进行真空过滤终止反应，并用液体闪烁计量化保留的放射性[1]。

 

　　动物给药[3]

 

　　小鼠：该实验在160只10-12周龄，体重为22-26 g的雄性BALB/c小鼠上进行。动物在12小时的光/暗循环下保持，控制温度（20 ±1°C），并在整个实验过程中随时提供饲料和水。小鼠被随机分为四个相等的组：对照组（0）不接受犬尿酸处理，以及三个实验组，分别以2.5、25或250 mg/L的浓度用饮水给予犬尿酸溶液。连续给予犬尿酸溶液3、7、14和28天后，每组10只个体被牺牲。动物通过吸入Aerrane麻醉，通过心穿刺采集血液。从每组的五个个体采集的血液用于MTT测定，从接下来的五个个体用于流式细胞术[3]。

 

　　MCE（MedChemExpress）未独立确认这些方法的准确性，仅供参考。

 

　　参考文献

 

　　[1]. Wang J, et al. Kynurenic acid as a ligand for orphan G protein-coupled receptor GPR35. J Biol Chem. 2006 Aug 4;281(31):22021-8.

 

　　[2]. Albuquerque EX, et al. Kynurenic acid as an antagonist of α7 nicotinic acetylcholine receptors in the brain: facts and challenges. Biochem Pharmacol. 2013 Apr 15;85(8):1027-32.

 

　　[3]. Małaczewska J, et al. Effect of oral administration of kynurenic acid on the activity of the peripheral blood leukocytes in mice. Cent Eur J Immunol. 2014;39(1):6-13.